內參抗體種類與選擇-分析方法-資訊-生物在線

內參抗體種類與選擇

作者:北京正旦國際科技有限責任公司試劑部 2012-11-26T00:00 (訪問量:16449)

內參即是內部參照(Internal Control),對于哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白(Housekeeping Proteins),它們在各組織和細胞中的表達水平相對恒定,在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。在Western Blotting中使用內參對應的抗體來檢測內參,這樣在檢測目的產物的同時可以檢測內參的表達,由于內參在各組織和細胞中 的表達相對恒定,借此,可檢測每個樣品內參的量繼而可以用于校正上樣誤差,這樣半定量的結果才更為可信。此外使用 內參可以作為空白對照,檢測蛋白轉膜情況是否完全、整個Western Blot顯色或者發光體系是否正常。 常用的蛋白質內參有GAPDH (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)和細胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin。 His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設計用于重組蛋白質的吸附純化。由于分子量較小,并且 較容易分離和純化,His融合標簽與其他標簽相比有很多明顯優勢,是目前用于純化的融合標簽中使用最為廣泛的一種。利 用His標簽可以建立一個基于融合蛋白的高效檢測和純化系統。His抗體可以用于檢測和His標簽融合表達蛋白的表達、細胞 內定位,以及純化、定性或定量檢測His融合表達蛋白等。 GST標簽體系具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可 從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層折得到。GST融合蛋白可被位點特異性蛋白酶裂解,從而除去GST蛋 白。 GFP標簽可位于蛋白質的C端或N端,該系統已廣泛應用于各種細胞類型,包括細菌、酵母和哺乳動物細胞等,相應的 GFP標簽抗體也被廣泛應用。 Myc標簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應用于WB雜交技術、免疫沉淀IP和流式細胞術中。因此可用于檢測重組蛋白在 細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。
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