土壤基因組DNA提取試劑盒?

? 產品簡介：本試劑盒適合于從褐土、淤泥、火山灰等各種極端土壤環境中提取微生物DNA。對土壤中各種細菌、真菌有很好裂解效果，最大限度的保留了微生物DNA的多態性。?
? 本試劑盒采用我公司特有的腐殖質吸附材料，可高效專一的去除各種腐殖質成分而絲毫不會影響DNA的產率，純度較酚、氯仿抽提法提高數倍。?
? 使用本試劑盒提取的DNA產量大、完整性好，可直接用于各種常規操作，包括酶切、PCR 、文庫構建、Southern 雜交等實驗。

操作步驟：

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機 在室溫下離心。?

1、稱取土壤樣本 0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成細粉末，加入 450ul 溶液 A 震蕩混勻。 也可直接稱取樣本 0.1-0.5g 于離心管(建議使用 2ml 圓底管)，加入 450ul 溶液 A 劇烈震蕩混勻 1-2min 至沒有固體塊。 使用液氮研磨效果最佳。?

2、加入 50ul 溶液 B 充分顛倒混勻 (不要劇烈震蕩)，65℃水浴 6min，每 2min 充分顛倒混勻一次。?

3、加入 100ul 溶液 C 充分顛倒混勻 (不要劇烈震蕩)，12000rpm 離心 10min 。

4、將上清轉移到新的離心管，12000rpm 離心 2min 。?

5、在吸附柱中加入 200ul 溶液 D ，將離心后的上清加入到帶有溶液 D 的吸附柱中，用移液器吹吸幾次混 勻，12000rpm 離心 1min。?

6、將收集管中的濾出液混勻后重新吸入吸附柱( 必須)，12000rpm 離心 1min。

7、倒掉收集管中的廢液，在吸附柱中加入漂洗液 500ul，12000rpm 離心 1min。?

8、倒掉收集管中的廢液，重復步驟 7 兩次(共漂洗三次)。?

9、倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管，12000rpm 離心 2min 。?

10、拿出吸附柱在室溫干燥數分鐘( 因季節及氣候等因素不等)，或 50℃干燥 1min。?

11、將吸附柱放入一個新的離心管中，加入 50-100ul 洗脫液(65 ℃預熱)，12000rpm 離心 1min。?

12、將離心管中的液體重新加入到吸附柱中，12000rpm 離心 1min。離心管中即為土壤微生物 DNA 溶液。?

13、若產物 PCR 效果差，可以適當稀釋 DNA 產物，或添加 1/10 體積的 PCR 增強劑。

注意事項 :?

1、新鮮的土壤樣本會得到更高的產率，不同樣本在采樣前應先查閱相應的最佳保存條件。?

2、若溶液中出現渾濁可在 37℃水浴中溶解片刻至清澈，不會影響結果。?

3、在需要吸取上清液的步驟中應避免吸到沉淀，否則會堵塞吸附柱，并影響產物純度。?

4、洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul ，體積過小會影響回收效率；建議使用試劑盒附帶的洗脫緩沖液， 用水洗脫也會損失部分產物；DNA 應保存在-20 ℃避免反復凍融，以防降解。?

5、若產物含有腐殖質殘余則會嚴重影響 DNA 的光吸收值，應采取電泳檢測和分光光度計檢測相結合的方 式鑒定。?

6、液體試劑避免接觸皮膚，若意外接觸應立即使用大量清水沖洗。