?Beaver家族明星產(chǎn)品——蛋白純化磁珠，一經(jīng)推出其秉承快速、高效、低成本的優(yōu)勢，獲得廣大小伙伴的追捧和歡迎。因此小伙伴們也提出了許多問日，小編就幾點(diǎn)常見的問題為大家分享。
１.IDA-鎳和IDA-鈷的區(qū)別，應(yīng)怎么選擇？
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答：IDA-鎳的蛋白載量高，40mg/mL gel，獲得蛋白純度稍低90%；IDA-鈷的蛋白載量稍低，25mg/mL gel獲得蛋白質(zhì)純度為95%。一般客戶建議購買IDA-鎳磁珠，即可達(dá)到目的。
2.蛋白純化時得到的蛋白量少，什么原因？
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答：（1）磁珠用量不足；
（2）蛋白濃度低；
（3）蛋白與磁珠親和力較低；
（4）磁珠重復(fù)使用次數(shù)太多，此時應(yīng)將磁珠進(jìn)行再生處理。
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3. 為什么使用IDA-Ni2+純化蛋白時，洗脫產(chǎn)物雜帶多？
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答：（1）菌體破碎條件太劇烈導(dǎo)致蛋白斷裂；
（2）蛋白被部分水解：添加合適的蛋白酶抑制劑，并盡可能在低溫下操作；
（3）雜蛋白吸附。由于組氨酸，色氨酸，半胱氨酸等是蛋白質(zhì)中很常見基團(tuán)，而蛋白折疊可能導(dǎo)致幾個這樣的氨基酸殘基臨近，這樣也會使它們和磁珠的作用力增加。可以用不同濃度的咪唑進(jìn)行梯度洗脫，在樣品及平衡緩沖液中添加0.5%吐溫或TritonX-100，或5~50%的甘油，可以避免因?yàn)槭杷嗷プ饔脤?dǎo)致非特異吸附，或使用鈷離子螯合磁珠（BeaverbeadsTMIDA-Cobalt）。
此外，要獲得純度較高的蛋白，需要對裂解、結(jié)合緩沖液、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液的組分、pH、咪唑濃度等進(jìn)行優(yōu)化。若還是不能獲得高純度的蛋白，則需要考慮使用多步純化，結(jié)合使用離子交換、凝聚過濾等純化方法。
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4. 目標(biāo)蛋白已經(jīng)偶聯(lián)到磁珠上，但是很難洗脫下來？
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答：（1）洗脫調(diào)節(jié)太溫和。提高洗脫液咪唑濃度至500mM，還不能洗脫時，可以嘗試降低洗脫液pH至4.0，但低pH會也導(dǎo)致金屬離子脫落；
（2） 蛋白吸附在磁珠上無法洗脫。對于非特異性疏水吸附的蛋白，可以增加NaCl濃度至1M，或添加0.1%~2%的Triton X-100。對于聚集沉淀在磁珠上的，可以在洗脫緩沖液中加入6M鹽酸胍進(jìn)行變性洗脫。
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5. 磁珠再生后，為什么蛋白純化效果會變差？
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答：①遇到此情況后，可在再生過程后進(jìn)行堿處理，可以改善再生磁珠的蛋白純化效果；
②重新掛金屬離子后需要將金屬離子清洗干凈，必要時可增加洗滌步驟。（殘留的金屬離子優(yōu)先跟蛋白結(jié)合，影響蛋白與磁珠的結(jié)合。）
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6. IDA磁珠產(chǎn)品中，緩沖液中咪唑添加的意義？
答：結(jié)合緩沖液中低濃度的咪唑是為了減少雜蛋白的非特異性吸附；洗滌緩沖液中低濃度咪唑是為了洗脫雜蛋白；洗脫液中高濃度咪唑是為了洗脫目的蛋白。