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人大腸桿菌O157酶聯免疫（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人大腸桿菌O157酶聯免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒定性測定人血液、或其它相關組織中大腸桿菌O157

實驗原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中人大腸桿菌O157。用純化的大腸桿菌O157抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中大腸桿菌O157相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的大腸桿菌O157抗體結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人大腸桿菌O157的存在與否。?

試劑盒組成：?

標本要求：?

1．標本處理：血清、血漿標本可直接檢測

2．標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測，可將標本在-20℃保存一個月，但應避免反復凍融。

3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1.?編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.?加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.?溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。???

4.?配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

5.?洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.?加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。?

7.?溫育：操作同3。

8.?洗滌：操作同5。

9.?顯色：每孔先加入顯色劑A?50μl，再加入顯色劑B?50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

10.?終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.?測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。?測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

結果判定：

??試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;?陰性對照平均值≤0.15

??臨界值（CUT?OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

??陰性判定：樣品OD值<?臨界值（CUT?OFF）者為人大腸桿菌O157陰性

??陽性判定：樣品OD值≥?臨界值（CUT?OFF）者為人大腸桿菌O157陽性

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．?封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

規格：

?????96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

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Shanghai?Yueyan?Biological?Technology?Co.,Ltd?

Address:Room1104,No.9Building,Ning?Guo?Road?No313,YangPu?District,Shanghai,China.?

Tel:+86-021-55785280?55785281?

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