原代培養是直接從生物體獲取組織或器官的一部分進行培養，也稱初代培養。嚴格地說，即從體內取出組織接種培養到第一次傳代階段；但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。一般持續1-4周，此期細胞活躍，可見細胞分裂，但不旺盛。原代培養細胞與體內原組織在形態結構和功能活動上相似性大，由于培養的細胞剛剛從活體組織分離出來，故更接近于生物體內的生活狀態。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段，同時也為以后傳代培養創造條件。
一 液體組織材料的分離方法
原代培養的過程指動物的組織或器官從機體取出后，經機械法或各種酶類（常用胰蛋白酶、膠原酶）和鰲合劑（常用EDTA）處理，使之分散成單個細胞，加入適量培養基，置于合適的培養容器中，在無菌、適當溫度和一定條件下，使之生存、生長和繁殖的過程。
對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分離液分離后接種培養。
1.將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉至離心管中，1000rpm離心5min；
2.棄上清，沉淀用無鈣、鎂的PBS重懸后，1000rpm離心5min；
3.重復上述離心操作2-3次；
4.用培養基重懸，調整適當細胞濃度后分瓶培養；
5.如選用懸液中某種細胞，可采用離心后的細胞分層液收獲目的細胞。
特點：簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。
實體組織材料的分離方法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用移液器反復吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長
胰蛋白酶消化法
原理：胰蛋白酶是一種胰臟制品，對蛋白質有水解作用，主要作用于賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵，使細胞間質中的蛋白質水解而使細胞分散開。
影響胰蛋白酶作用的主要因素：細胞類型、酶的活力、酶的濃度、溫度、pH、無機鹽離子、消化時間等。
Ⅱ、非酶消化法（EDTA消化法）
EDTA是一種非酶消化物，又稱螯合劑或Versene，全名為乙烯二胺四乙酸。常用不含鈣、鎂離子的PBS配成0.02%的工作液，對一些組織，尤其是上皮組織分散效果好，該化學物質能與細胞上的鈣、鎂離子結合形成螯合物，利用結合后的機械力使細胞變圓而分散細胞或使貼壁細胞從瓶壁上脫離。
Ⅲ、消化分離法的注意事項
(1)組織塊必須漂洗2-3次以除去組織中的鈣、鎂離子及血清，盡最大限度減少對胰蛋白酶和EDTA的抑制作用；
(2)胰蛋白酶濃度不宜過高，作用時間不能太長，以避免毒性作用；
(3)消化后組織不僅要盡量棄去消化液，以避免毒性產生，而且動作要輕，以避免膨松的細胞隨漂洗而丟失。