?H2S?含量測定試劑盒說明書
可見分光光度法 正式測定前務必取 2-3?個預期差異較大的樣本做預測定
產品內容：
提取液：液體 50mL×1?瓶，4℃保存。試劑一：液體 25mL×1?瓶，4℃保存。試劑二：液體 15mL×1?瓶，4℃保存。
試劑三：液體 15mL×1?瓶，4℃避光保存。試劑四：液體 15mL×1?瓶，4℃保存。
試劑五：液體 3mL×1?管，4℃避光保存。
產品說明：
H2S?是一種新型氣態信號分子，存在于腦內的神經遞質，生理濃度的 H2S?對神經系統海馬的長時程增強功能具有重要的調節作用，并對自發性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發揮著重要的病理生理效應。
H2S?與醋酸鋅、N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應生成亞甲基藍，亞甲基藍在
665nm 處有最大吸收峰，通過測定其吸光值可計算 H2S?含量。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計 1ml 玻璃比色皿、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品處理：
1.?組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 ?的比例（建議稱取約 0.1g ?組織，加入 1mL?提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2.?細菌、真菌：按照細胞數量（10 4?個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1??的比例（建議
500 ?萬細胞加入 1mL??提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 ?秒，間隔 7
秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
3.?血清（漿）：直接測定。
二、測定步驟： （取 1.5ml 離心管，按照下表操作）
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? |
空白管 |
測定管 |
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樣品（μL） |
? |
250 |
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H2O（μL） |
250 |
? |
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試劑一（μL） |
250 |
250 |
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充分震蕩混勻 |
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試劑二（μL） |
250 |
250 |
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12000rpm，4℃，離心 10min，去上清，留沉淀 |
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H2O（μL） |
500 |
500 |
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12000rpm，4℃，離心 10min，去上清，留沉淀 |
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試劑一（μL） |
250 |
250 |
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試劑三（μL） |
250 |
250 |
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充分震蕩混勻 |
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試劑四（μL） |
250 |
250 |
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12000rpm，4℃，離心 10min，取上清 |
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試劑五（μL） |
50 |
50 |
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混勻，25℃靜置20min，于微量石英比色皿/96孔板中，空白管調零，測定665nm吸光值， 記為A665。 |
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?
三、H2S 含量計算公式：
標準曲線回歸方程為：y = 0.0044x，R2 = 0.9988
（1）組織樣品
a.按照蛋白濃度計算
H2S（μmol/mg prot）= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr
b.按照樣本重量計算
H2S（μmol/g）= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10
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