支原體檢測試劑盒
本 支原體檢測試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區域，因為支原體的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測 到。被支原體污染的細胞經染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的最大激發波長為346nm，最大發射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，最大激發波長為352nm，最大發射波長為461nm。
貨號：CA1080
規格：1kit
保存：4℃保存，有效期為2年，Hoechst工作液需要避光保存。
試劑盒主要組成：
?????????????Hoechst 33258工作液?????????50ml
??????????????????固定液?????????????????50ml
?????????????抗熒光衰減封片液????????????10ml
??????????????????說明書?????????????????1份
結果判斷（參考）：
陰性：僅見細胞的細胞核呈現黃綠色熒光。
陽性：除細胞外，細胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。
注意事項：
1．Hoechst工作液對人體有害，請注意防護。
2．固定液有刺激性氣味，建議在通風櫥進行固定。
3．支原體檢測時，最好用不含抗生素的培養液培養2～3代，這樣容易避免假陰性結果。
4．本試劑盒用于6孔板檢測時，可以進行50次檢測反應。
5．檢測支原體污染，可以使用支原體高效Vero細胞，這樣可以提高檢測靈敏度，即將被檢測樣品接種于Vero細胞進行檢測。
操作步驟：?
貼壁細胞：
1、被檢細胞接種于無菌的 6 孔細胞培養板中，接種密度為 1-2×104
。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。
2、5 天后，先吸去培養液，再加入 1ml 的固定液，靜置 20min，
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置 15-20min 或室溫靜置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，加入 2ml 滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。?懸浮細胞：
1、收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。
2、將收集的細胞涂片于載玻片上，再加 1ml 的固定液，靜置 20min。
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置 15～20min 或室溫靜置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，用無菌水洗滌玻片 3 次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
結果判斷（參考）：
陰性：僅見細胞的細胞核呈現黃綠色熒光。
陽性：除細胞外，細胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。
注意事項：
1．Hoechst工作液對人體有害，請注意防護。
2．固定液有刺激性氣味，建議在通風櫥進行固定。
3．支原體檢測時，最好用不含抗生素的培養液培養 2～3 代，這樣容易避免假陰性結果。
4．本試劑盒用于 6 孔板檢測時，可以進行 50 次檢測反應。
5．檢測支原體污染，可以使用支原體高效 Vero 細胞， 這樣可以提高檢測靈敏度，即將被檢測樣品接種于 Vero
細胞進行檢測。
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