細(xì)胞交叉污染?-自主發(fā)布-資訊-生物在線

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細(xì)胞交叉污染?

作者:上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司 2022-01-10T16:50 (訪問(wèn)量:18839)

哺乳動(dòng)物細(xì)胞系在疫苗生產(chǎn)、單克隆抗體制備、藥物篩選和基因重組產(chǎn)品等生物醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。細(xì)胞系錯(cuò)用、交叉污染等問(wèn)題,會(huì)造成巨大損失。翼和生物結(jié)合近7年細(xì)胞系遺傳質(zhì)量鑒定方面的服務(wù)經(jīng)驗(yàn),制定了一套特色檢測(cè)方案,幫您及時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞交叉污染問(wèn)題。翼和方案兩步排查,確保細(xì)胞系質(zhì)量:首先,人源/小鼠細(xì)胞STR鑒定,排查是否存在種內(nèi)細(xì)胞交叉污染;其次,若細(xì)胞基因組DNA質(zhì)量正常,STR擴(kuò)增卻沒(méi)有信號(hào),可進(jìn)行細(xì)胞種屬檢測(cè),排查是否存在種間細(xì)胞交叉污染,可區(qū)分人、小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠等4個(gè)物種的交叉污染

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中交叉污染的概率


據(jù)ATCC估計(jì),1977年錯(cuò)誤使用細(xì)胞的概率是16%,1999年是18%。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),國(guó)內(nèi)細(xì)胞系用錯(cuò)的概率不低于20%;即如果一個(gè)研究所有二十個(gè)課題組,按概率估計(jì),有4個(gè)課題組用的細(xì)胞是錯(cuò)的。

2017年,武漢大學(xué)病毒學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室發(fā)表了一篇文章,主題便是“278株常見(jiàn)人源腫瘤細(xì)胞系的交叉污染及錯(cuò)誤鑒定(Investigation of Cross-Contamination and Misidentification of 278 Widely Used Tumor Cell Lines)”,該實(shí)驗(yàn)室采用STR分型方法進(jìn)行細(xì)胞系遺傳背景鑒定,結(jié)果得到了一個(gè)可怕的結(jié)果。

作者分別從國(guó)內(nèi)28個(gè)研究機(jī)構(gòu)搜集了278株常見(jiàn)人源腫瘤細(xì)胞系,其中國(guó)內(nèi)建立的細(xì)胞系71株,國(guó)外建立的細(xì)胞系207株。經(jīng)STR鑒定后發(fā)現(xiàn),來(lái)自于22個(gè)研究機(jī)構(gòu)的128株細(xì)胞存在交叉污染/錯(cuò)誤鑒定的情況,錯(cuò)誤率高達(dá)46%。其中國(guó)內(nèi)建立的細(xì)胞系占52株,這表明了什么,國(guó)內(nèi)建立的細(xì)胞系交叉污染/錯(cuò)誤鑒定率竟然高達(dá)73.2%,并且67.3%(35/52)國(guó)內(nèi)交叉污染/錯(cuò)誤鑒定的細(xì)胞系結(jié)果被證實(shí)是Hela細(xì)胞或被Hela細(xì)胞部分污染的!

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種內(nèi)細(xì)胞交叉污染檢測(cè)

人源細(xì)胞系:翼和生物采用21個(gè)人源STR位點(diǎn)方案,包括國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn)的8個(gè)STR和1個(gè)性別鑒定位點(diǎn)在內(nèi),具有更高分辨率,可與5個(gè)國(guó)際權(quán)威細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),出具專業(yè)的細(xì)胞系遺傳質(zhì)量鑒定中英文報(bào)告。

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人源細(xì)胞系21 STR位點(diǎn)ABI3730xl毛細(xì)管電泳峰圖

STR基因分型比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)果示例

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小鼠細(xì)胞系:翼和生物利用熒光PCR擴(kuò)增小鼠基因組中9個(gè)STR基因座位,PCR產(chǎn)物在毛細(xì)管電泳分離之后可通過(guò)熒光檢測(cè)進(jìn)行基因分型。同時(shí)加入1個(gè)人源STR位點(diǎn),同步排查人源細(xì)胞系交叉污染。根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫(kù)(Expasy)比對(duì),從而鑒定樣本所數(shù)的小鼠細(xì)胞系。
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小鼠STR分型圖譜及檢測(cè)結(jié)果
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種間細(xì)胞交叉污染檢測(cè)

上海翼和生物為客戶提供基于qPCR技術(shù)的種系鑒定方案,選擇人、小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠基因組中特異基因片段,設(shè)計(jì)引物和熒光探針,快速鑒定種系來(lái)源。該方案靈敏度和特異性高,可以檢測(cè)樣本中不同種系來(lái)源的細(xì)胞污染,當(dāng)污染細(xì)胞占比> 5% 時(shí),可被穩(wěn)定檢出。

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Panel1 人源小鼠體系:只有人源、小鼠樣本會(huì)擴(kuò)增,大鼠、倉(cāng)鼠不擴(kuò)增;藍(lán)色為人源擴(kuò)增曲線;綠色為小鼠擴(kuò)增曲線

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Panel2 大鼠倉(cāng)鼠體系:只有大鼠、倉(cāng)鼠樣本會(huì)擴(kuò)增,人源、小鼠不擴(kuò)增;藍(lán)色為倉(cāng)鼠擴(kuò)增曲線,紅色為大鼠擴(kuò)增曲線

關(guān)于翼和

上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是上海市遺傳學(xué)會(huì)理事單位,至今已有十六年歷史,專注于為國(guó)內(nèi)科研工作者和生物醫(yī)藥企業(yè)提供各類(lèi)分子遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和質(zhì)控試劑盒。基于自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的多重PCR技術(shù),翼和生物研發(fā)和改良了適用于熒光定量PCR、一代測(cè)序和二代高通量測(cè)序平臺(tái)的多種檢測(cè)技術(shù)和產(chǎn)品,逐步形成了在細(xì)胞組織和動(dòng)物模型質(zhì)控、大健康基因檢測(cè)和科學(xué)研究3大板塊產(chǎn)品布局。近年來(lái),翼和生物在首席科學(xué)家肖君華教授帶領(lǐng)下,研發(fā)推出了10多項(xiàng)創(chuàng)新技術(shù)和產(chǎn)品,并致力于建設(shè)符合國(guó)家和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。這給企業(yè)注入了新的生命力,促進(jìn)了翼和生物的高速發(fā)展。未來(lái),翼和生物必將發(fā)展成為該領(lǐng)域國(guó)內(nèi)一流的專業(yè)供應(yīng)商。

17年專業(yè)服務(wù)經(jīng)驗(yàn),值得信賴!

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