細胞交叉污染?-自主發布-資訊-生物在線

細胞交叉污染?

作者:上海翼和應用生物技術有限公司 2022-01-10T16:50 (訪問量:17494)

哺乳動物細胞系在疫苗生產、單克隆抗體制備、藥物篩選和基因重組產品等生物醫藥領域有著廣泛的應用。細胞系錯用、交叉污染等問題,會造成巨大損失。翼和生物結合近7年細胞系遺傳質量鑒定方面的服務經驗,制定了一套特色檢測方案,幫您及時發現細胞交叉污染問題。翼和方案兩步排查,確保細胞系質量:首先,人源/小鼠細胞STR鑒定,排查是否存在種內細胞交叉污染;其次,若細胞基因組DNA質量正常,STR擴增卻沒有信號,可進行細胞種屬檢測,排查是否存在種間細胞交叉污染,可區分人、小鼠、大鼠和倉鼠等4個物種的交叉污染

細胞培養過程中交叉污染的概率


據ATCC估計,1977年錯誤使用細胞的概率是16%,1999年是18%。根據我們的經驗,國內細胞系用錯的概率不低于20%;即如果一個研究所有二十個課題組,按概率估計,有4個課題組用的細胞是錯的。

2017年,武漢大學病毒學國家重點實驗室發表了一篇文章,主題便是“278株常見人源腫瘤細胞系的交叉污染及錯誤鑒定(Investigation of Cross-Contamination and Misidentification of 278 Widely Used Tumor Cell Lines)”,該實驗室采用STR分型方法進行細胞系遺傳背景鑒定,結果得到了一個可怕的結果。

作者分別從國內28個研究機構搜集了278株常見人源腫瘤細胞系,其中國內建立的細胞系71株,國外建立的細胞系207株。經STR鑒定后發現,來自于22個研究機構的128株細胞存在交叉污染/錯誤鑒定的情況,錯誤率高達46%。其中國內建立的細胞系占52株,這表明了什么,國內建立的細胞系交叉污染/錯誤鑒定率竟然高達73.2%,并且67.3%(35/52)國內交叉污染/錯誤鑒定的細胞系結果被證實是Hela細胞或被Hela細胞部分污染的!

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種內細胞交叉污染檢測

人源細胞系:翼和生物采用21個人源STR位點方案,包括國際金標準的8個STR和1個性別鑒定位點在內,具有更高分辨率,可與5個國際權威細胞數據庫進行比對,出具專業的細胞系遺傳質量鑒定中英文報告。

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人源細胞系21 STR位點ABI3730xl毛細管電泳峰圖

STR基因分型比對數據庫結果示例

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小鼠細胞系:翼和生物利用熒光PCR擴增小鼠基因組中9個STR基因座位,PCR產物在毛細管電泳分離之后可通過熒光檢測進行基因分型。同時加入1個人源STR位點,同步排查人源細胞系交叉污染。根據所得的STR分型結果與細胞STR數據庫(Expasy)比對,從而鑒定樣本所數的小鼠細胞系。
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小鼠STR分型圖譜及檢測結果
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種間細胞交叉污染檢測

上海翼和生物為客戶提供基于qPCR技術的種系鑒定方案,選擇人、小鼠、大鼠和倉鼠基因組中特異基因片段,設計引物和熒光探針,快速鑒定種系來源。該方案靈敏度和特異性高,可以檢測樣本中不同種系來源的細胞污染,當污染細胞占比> 5% 時,可被穩定檢出。

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Panel1 人源小鼠體系:只有人源、小鼠樣本會擴增,大鼠、倉鼠不擴增;藍色為人源擴增曲線;綠色為小鼠擴增曲線

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Panel2 大鼠倉鼠體系:只有大鼠、倉鼠樣本會擴增,人源、小鼠不擴增;藍色為倉鼠擴增曲線,紅色為大鼠擴增曲線

關于翼和

上海翼和應用生物技術有限公司是上海市遺傳學會理事單位,至今已有十六年歷史,專注于為國內科研工作者和生物醫藥企業提供各類分子遺傳學技術服務和質控試劑盒。基于自主知識產權的多重PCR技術,翼和生物研發和改良了適用于熒光定量PCR、一代測序和二代高通量測序平臺的多種檢測技術和產品,逐步形成了在細胞組織和動物模型質控、大健康基因檢測和科學研究3大板塊產品布局。近年來,翼和生物在首席科學家肖君華教授帶領下,研發推出了10多項創新技術和產品,并致力于建設符合國家和國際標準的檢測實驗室。這給企業注入了新的生命力,促進了翼和生物的高速發展。未來,翼和生物必將發展成為該領域國內一流的專業供應商。

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