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丙二醛(MDA)含量檢測試劑盒
品牌：Solarbio | 貨號：BC0025
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| 英文名稱 | Micro Malondialdehyde (MDA) Assay Kit |
|---|---|
| 別名 | 丙二醛試劑盒 MDA Kit 丙二醛（MDA）試劑盒 丙二醛（MDA）試劑盒 |
| 檢測方法 | 微量法 |
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測定意義：氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質；后者逐漸分解為一系列復雜的化合物，其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質氧化的水平。
測定原理：MDA與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產物，在532nm有最大吸收峰，進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量；同時測定600nm下的吸光度，利用532nm與600nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。
需自備的儀器和用品： 可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 缽、冰和蒸餾水。?
產品內容：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2 瓶，4℃保存；
MDA 檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二中加入 15mL 試劑一，溶解混勻，4℃保存待用。
試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；
注意事項：MDA 檢測工作液較難溶解，可以 70℃加熱，并劇烈振蕩以促進溶解?；蛘咄ㄟ^超聲處 理以促進溶解。
產品說明： 氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質；后者逐漸分解為一系列復雜的化合物， 其中包括丙二醛 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質氧化的水平。 丙二醛（MDA）在酸性和高溫條件下，可以與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生 成棕紅色的三甲川（3,5,5-三甲基惡唑-2，4-二酮），其最大吸收波長在 532nm。進行比色后可估測 樣品中過氧化脂質的含量。但是測定植物組織中 MDA 時受多種物質的干擾，其中最主要的是可溶 性糖，糖與 TBA 顯色反應產物的最大吸收波長在 450nm，但 532nm 處也有吸收。所以同時測定 600nm、 532nm、450nm 下的吸光度，利用 532nm 與 450nm、600nm 下的吸光度的差值計算 MDA 的含量。 由于植物中受蔗糖干擾較大，動物中受葡萄糖干擾較大，所以本試劑盒有針對蔗糖和葡萄糖的 兩個公式。若所測樣品為油脂類物質，則兩個公式均可。?
操作步驟：
一、MDA 提取：
1、細菌或細胞樣品的制備：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 400 萬細菌或細 胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃ 離心 10min，取上清，置冰上待測。
2. 組織樣品的制備：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取 上清，置冰上待測。
3. 血清（漿）：直接檢測。
二、測定步驟：
1、可見分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上，蒸餾水調零。
2、按下表步驟加樣：?
混合液在 100℃水浴中保溫 60min 后（蓋緊，防止水分散失），置于冰浴中冷卻，10000g，常溫， 離心 10min。吸取 200μL 上清液于微量玻璃比色皿或 96 孔板中，測定各樣品在 450nm、532nm 和 600nm 處的吸光度。分別計算?A450=A450 測定-A450 空白，?A532=A532 測定-A532 空白，?A600=A600 測 定-A600 空白?？瞻坠苤恍枳?1-2 次。
三、MDA 含量計算：
a.按 96 孔板計算
1、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算
（1）按照蛋白濃度計算 MDA 含量（nmol/mg prot）=(12.9×(?A532-?A600)-2.58×?A450)×V 總÷(Cpr×V 樣本) =5×(12.9×(?A532-?A600)-2.58×?A450)÷Cpr
（2）按照樣品質量計算 MDA 含量（nmol/g 鮮重）=(12.9×(?A532-?A600)-2.58×?A450)×V 總÷(W×V 樣本÷V 提取) =5×(12.9×(?A532 -?A600)-2.58×?A450)÷W
? (3) 按照細菌或細胞密度計算： MDA 含量（nmol/104 cell）=(12.9×(?A532-?A600)-2.58×?A450)×V 總÷(400÷V 提取×V 樣本) =0.125×(12.9×(?A532-?A600)-2.58×?A450)
（4）按血清（漿）體積計算： MDA 含量（nmol/mL）=(12.9×(?A532-?A600)-2.58×?A450)×V 總÷V 樣本 =5×(12.9×(?A532 -?A600)-2.58×?A450)
V 總：反應體系總體積，0.5mL；V 樣品：加入樣品體積，0.1 mL；
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。 W：樣品質量，
g；400：細胞或細菌總數，400 萬；V 提?。禾崛∫后w積，1mL。
2、植物組織中 MDA 含量計算
（1）按照樣品質量計算 MDA 含量（nmol/g 鮮重）=(12.9×(?A532-?A600)-1.12×?A450)×V 總÷(W×V 樣本÷V 提取) =5×(12.9×(?A532-?A600)-1.12×?A450)÷W
（2）按照蛋白濃度計算 MDA 含量（nmol/mg prot）=(12.9×(?A532-?A600)-1.12×?A450)×V 總÷(Cpr×V 樣本) =5×(12.9×(?A532-?A600)-1.12×?A450)÷Cpr
V 總：反應體系總體積，0.5mL；V 樣品：加入樣品體積，0.1 mL；
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；V 提?。禾崛∫后w積，1mL。
b.按微量比色皿計算
1、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算
（1）按照蛋白濃度計算 MDA 含量（nmol/mg prot）=(6.45 ×(?A532-?A600)-1.29×?A450)×V 總÷(Cpr×V 樣本) =5×(6.45 ×(?A532-?A600)-1.29×?A450)÷Cpr
（2）按照樣品質量計算 MDA 含量（nmol/g 鮮重）=(6.45 ×(?A532-?A600)-1.29×?A450)×V 總÷(W×V 樣本÷V 提取) =5×(6.45 ×(?A532-?A600)-1.29×?A450)÷W
? (3) 按照細菌或細胞密度計算： MDA 含量（nmol/104 cell）=(6.45 ×(?A532-?A600)-1.29×?A450)×V 總÷(400×V 樣本÷V 提取) =0.0125×(6.45 ×(?A532-?A600)-1.29×?A450)
（4）按血清（漿）體積計算： MDA 含量（nmol/mL）=(6.45×(?A532-?A600)-1.29×?A450)×V 總÷V 樣本 =5×(6.45×(?A532 -?A600)-1.29×?A450)
V 總：反應體系總體積，0.5mL；V 樣品：加入樣品體積，0.1 mL；
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣品質量，
g；400：細胞或細菌總數，400 萬；V 提?。禾崛∫后w積，1mL。
2、植物組織中 MDA 含量計算
（1）按照樣品質量計算 MDA 含量（nmol/g 鮮重）=(6.45 ×(?A532-?A600)-0.56×?A450)×V 總÷(W×V 樣本÷V 提取) =5×(6.45 ×(?A532-?A600)-0.56×?A450)÷W
（2）按照蛋白濃度計算 MDA 含量（nmol/mg prot）=(6.45 ×(?A532-?A600)-0.56×?A450)×V 總÷(Cpr×V 樣本) =5×(6.45 ×(?A532-?A600)-0.56×?A450)÷Cpr
V 總：反應體系總體積，0.5mL；V 樣品：加入樣品體積，0.1 mL；
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣品質量，g；V 提?。禾崛∫后w積，1mL。
注意事項： 若發現檢測樣本吸光值過低，可以將沸水浴時間 60min 調整為 90min 或者更長，但同一實驗中 的 MDA 的檢測都需要延長到同一時間以免引起誤差。
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