?【產品名稱】
??通用名稱：日本乙型腦炎病毒檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
??英文名稱：Japanese encephalitis virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規格】25T/盒 & 50T/盒
【預期用途】
本試劑盒利用實時熒光PCR原理，定性檢測乙型腦炎病毒，對乙型腦炎病毒引起的感染及其并發癥的診斷及療效評估有重要指導意義。
【檢驗原理】
本試劑盒針對JEV基因組高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含JEV基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。
【主要組成成份】
|
序號 |
組成 |
25T/盒 |
50T/盒 |
|
1 |
JEV RT-PCR反應液 |
375 μL×1管 |
750 μL×1管 |
|
2 |
??JEV逆轉錄酶 |
?50 μL×1管 |
100 μL×1管 |
|
3 |
??JEV?Taq酶 |
?75 μL×1管 |
150 μL×1管 |
|
4 |
??JEV陽性對照 |
?40 μL×1管 |
?40 μL×1管 |
|
5 |
??JEV陰性對照 |
?40 μL×1管 |
?40 μL×1管 |
|
6 |
說明書 |
1份 |
1份 |
注：陰性對照為人基因組DNA，陽性對照為失去活性的JEV?cDNA。
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。
【樣本要求】
1.從血清或腦脊液獲取樣本。
2.應避免標本間交叉污染。
6.樣品如不及時檢測，應于-20℃至-80℃凍存。標本運輸應于冷凍條件下進行
【檢驗方法】
1.?試劑準備（試劑準備區）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
（2）核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數
|
單反液配制表(每份) |
RT-PCR反應液 |
15.0 μL |
|
逆轉錄酶 |
?2.0 μL |
|
|
Taq酶 |
?3.0 μL |
?(3)在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。
2.樣本準備（樣本處理區）
用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。
（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。
|
反應體積 |
25 μL |
通道選擇 |
FAM通道采集JEV 熒光信號 |
|
PCR 反應 條件 |
步驟 |
條件 |
循環數 |
|
反轉錄 |
?42℃：10分鐘（min） |
1 |
|
|
預變性 |
95℃：3分鐘（min） |
1 |
|
|
預擴增 |
95℃：5秒（s） |
5 |
|
|
55℃：40秒（s） |
|||
|
PCR擴增 |
95℃：5秒（s） |
40 |
|
|
55℃：40秒（s） （此階段結束時采集熒光信號） |
（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增。
注：ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正，設置淬滅基團選擇None。
【參考值（參考范圍）】
上海雅吉生物科技有限公司 商家主頁
地 址： 上海市閔行區元江路5500號第1幢5658室
聯系人： 王源
電 話： 15301693058
傳 真： 021-34661275
Email：yajikit@163.com