Q：SDS-PAGE電泳凝膠中各主要成分的作用？

A: 聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺為蛋白質電泳提供載體，其凝固的好壞直接關系到電泳成功與否，與促凝劑及環境密切相關；制膠緩沖液：濃縮膠選擇pH6.8，分離膠選擇pH8.8，選擇Tris－HCL系統。

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Q：TEMED與AP的作用？

A：促凝作用，加速聚丙烯酰胺的凝固。

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Q：十二烷基硫酸鈉（SDS）的作用？

A：陽離子去污劑，作用有四：去蛋白質電荷、解離蛋白質之間的氫鍵、取消蛋白分子內的疏水作用、去多肽折疊。

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Q：提高SDS-PAGE電泳分辨率的途徑？

A：1、聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝膠的分辨率。建議做法：待凝膠在室溫凝固后，可在室溫下放置一段時間使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易導致凝固不充分，后者可導致SDS結晶。一般凝膠可在室溫下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。

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???2、一般常用的有氨基黑、考馬斯亮藍、銀染色三種染料，不同染料有各自不同的染色方法，具體可參照郭堯君編著的《蛋白質電泳技術手冊》P82-103。

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Q：“微笑”（兩邊翹起中間凹下）形帶原因？

A：主要是由于凝膠的中間部分凝固不均勻所致，多出現于較厚的凝膠中。處理辦法：待其充分凝固再作后續實驗。

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Q：“皺眉”（兩邊向下中間鼓起）形帶原因？

A：主要出現在蛋白質垂直電泳槽中，一般是兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈。處理辦法：可在兩板間加入適量緩沖液，以排除氣泡。

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Q：為什么帶出現拖尾現象？

A：主要是樣品融解效果不佳或分離膠濃度過大引起的。處理辦法：加樣前離心；選擇適當的樣品緩沖液，加適量樣品促溶劑；電泳緩沖液時間過長，重新配制；降低凝膠濃度。

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Q：為什么帶出現紋理現象？

A：主要是樣品不溶性顆粒引起的。處理辦法：加樣前離心；加適量樣品促溶劑。

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Q：什么是“鬼帶”，如何處理？

A：“鬼帶”就是在跑大分子構象復雜的蛋白質分子時，常會出現在泳道頂端（有時在濃縮膠中）的一些大分子未知條帶或加樣孔底部有沉淀，主要由于還原劑在加熱的過程中被氧化而失去活性，致使原來被解離的蛋白質分子重新折疊結合和亞基重新締合，聚合成大分子，其分子量要比目標條帶大，有時不能進入分離膠。但它卻于目標條帶有相同的免疫學活性，在WB反應中可見其能與目標條帶對應的抗體作用。處理辦法：在加熱煮沸后，再添加適量的DTT或Beta巰基乙醇，以補充不足的還原劑；或可加適量EDTA來阻止還原劑的氧化。

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Q：為什么溴酚藍不能起到指示作用？

A：我們在實驗中常會遇到溴酚藍已跑出板底，但蛋白質卻還未跑下來的現象。主要與緩沖液和分離膠的濃度有關。處理辦法：更換正確pH值的Buffer；降低分離膠的濃度。

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Q：為什么電泳的條帶很粗？

A：電泳中條帶很粗是常見的事，主要是未濃縮好的原因。處理辦法：適當增加濃縮膠的長度；保證濃縮膠貯液的pH正確（6.8）；適當降低電壓。

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