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?【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：甲型流感病毒（通用型）檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法）

英文名稱：Influenza A virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】 25T/盒 & 50T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于甲型流感病毒檢測(cè)，不進(jìn)行病毒分型，可用于臨床甲型流感病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒針對(duì)甲型流感病毒基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含甲型流感病毒基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。

【主要組成成份】

注：陰性對(duì)照為人基因組DNA，陽性對(duì)照為失去活性的甲型流感病毒cDNA。

【儲(chǔ)存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

采用鼻拭子、咽拭子等方法獲得樣本。具體操作方法如下：

（1）鼻拭子： 操作者將沾濕的無菌拭子平行于上腭的角度輕輕地左右轉(zhuǎn)動(dòng)從一側(cè)鼻孔插入至鼻道內(nèi)鼻腭處，一般當(dāng)拭子插入有阻力時(shí)再將拭子停留2～3s后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。

（2）咽拭子：操作者一手持壓舌板壓住病人舌后根，另一手拿住無菌拭子根部，然后將沾濕的無菌拭子左右兩面及拭子頭部快速且較用力地分別刮取扁桃腺兩側(cè)及咽后壁的分泌物。

（3）將鼻拭子和咽拭子一起放人盛有1.0ml生理鹽水的離心管中備用。

應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。

標(biāo)本收集后可立即檢測(cè)；若不能立即檢測(cè)，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長(zhǎng)期保存，標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下，避免反復(fù)凍融。

【檢驗(yàn)方法】

1.?試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體。

（2）核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)（n），并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。

n =陰性對(duì)照數(shù)（1T）+陽性對(duì)照數(shù)（1T）+誤差預(yù)留量（1T）+樣本數(shù)

（3）在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

2.樣本準(zhǔn)備（樣本處理區(qū)）

用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對(duì)照和陽性對(duì)照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽性對(duì)照品，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

4.PCR（PCR擴(kuò)增區(qū)）

（1）取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管，放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置，并記錄放置順序。

（2）按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。