?1.?準備溶液：室溫融解試劑盒中的三種試劑，溶解后立即放置在冰上，混勻。取適當量的細胞漿蛋白抽提試劑A備用，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。取適當量的細胞核蛋白抽提試劑備用，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2.?對于貼壁細胞：用PBS洗一遍，用細胞刮子刮下細胞，或用EDTA溶液處理細胞使細胞不再貼壁很緊，并用移液器吹打下細胞。離心收集細胞，盡最大努力吸盡上清，留下細胞沉淀備用。盡量避免用胰酶消化細胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3.?對于懸浮細胞：用PBS洗一遍，離心收集細胞，盡最大努力吸盡上清，留下細胞沉淀備用。
4. 每20微升細胞沉淀加入200微升添加了PMSF的細胞漿蛋白抽提試劑A。(對于二百萬HeLa細胞，其細胞沉淀的體積大約為20微升或40毫克。)
5. 最高速劇烈Vortex 5秒，把細胞沉淀完全懸浮并分散開。(如果細胞沉淀沒有完全懸浮并分散開，可以適當延長vortex時間。)
6. 冰浴10-15分鐘。
7. 加入細胞漿蛋白抽提試劑B?10微升。最高速劇烈Vortex 5秒，冰浴1分鐘。
8. 最高速劇烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g離心5分鐘。
9. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中，即為抽提得到的細胞漿蛋白。可以立即使用，也可以凍存。(千萬不要觸及沉淀，可以在沉淀上方保留極小體積的上清，以免觸及沉淀。每200萬細胞用200微升本產品中的細胞漿蛋白抽提試劑A裂解后可獲得的上清，其細胞漿蛋白濃度約為2-5mg/ml，不同細胞有所不同。)
10. 對于沉淀，完全吸盡殘余的上清，加入50微升添加了PMSF的細胞核蛋白抽提試劑。(不吸盡上清會帶來細胞漿蛋白的污染。)
11. 最高速劇烈Vortex 15-30秒，把細胞沉淀完全懸浮并分散開。然后放回冰浴中，每隔1-2分鐘再高速劇烈Vortex 15-30秒，共30分鐘。
12. 4℃ 12,000-16,000g離心10分鐘。
13. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中，即為抽提得到的細胞核蛋白?？梢粤⒓词褂?，也可以-70℃凍存。每200萬細胞用50微升本產品中的細胞核蛋白抽提試劑裂解后獲得的上清，其細胞核蛋白濃度約為1.2-3.0mg/ml，不同細胞有所不同。
14.?對于新鮮組織：
a. 把組織盡可能切成非常細小的碎片。按照20:1的比例混合適當量的細胞漿蛋白抽提試劑A和B(例如200微升細胞漿蛋白抽提試劑A中加入10微升抽提試劑B)。并加入PMSF至最終濃度為1mM配制成組織勻漿液。按照每60mg組織加入200微升組織勻漿液的比例混合組織和組織勻漿液(對于不超過30mg的組織樣品，僅需加入100微升組織勻漿液)，并在玻璃勻漿器內充分勻漿。勻漿需在冰浴或4℃進行。
b. 勻漿后把勻漿液轉移到塑料離心管內，冰浴放置15分鐘。
c. 4℃ 1,500g離心5分鐘。把上清轉移至一預冷的塑料管中，為抽提得到的部分細胞漿蛋白。(吸上清時千萬不要觸及沉淀。)
d. 對于沉淀，到了這一步已經充分勻漿，但很多細胞還沒有破碎。接下去按照使用說明的步驟4開始操作，即把沉淀當做已經離心收集好的細胞沉淀操作，按照步驟4至步驟13抽提得到細胞漿蛋白和細胞核蛋白(特別說明：對于起始量為30-60mg的組織樣品，后續直接按照步驟4-13操作即可；對于起始量不超過30mg的組織樣品，后續步驟4-13中的溶液的用量須減半使用)。抽提得到的細胞漿蛋白可以和步驟14c中抽提得到的細胞漿蛋白合并。新鮮的肝臟組織用本產品裂解后獲得的上清，其細胞漿蛋白濃度約為3-10mg/ml，細胞核蛋白濃度約為3-10mg/ml，不同狀態的不同組織有所不同。