??pShuttle-CMV-C-DsRed (腺病毒質粒, 紅色熒光)是自行研發的用于構建表達C端DsRed(紅色熒光蛋白)融合蛋白的重組腺病毒包裝用的穿梭質粒。本穿梭質粒構建后，需要和預轉染了pAdEasy-1質粒的BJ5183菌株(D8107)以及重組腺病毒包裝細胞配合使用才能完成重組腺病毒的包裝。

pShuttle-CMV-C-DsRed質?？梢杂糜谠诎b成腺病毒后表達C端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein，香菇珊瑚紅色熒光蛋白)標簽的融合蛋白。該質粒含有CMV啟動子，可以高效啟動目的蛋白在細胞中的表達。在多克隆位點的后面有一個DsRed的完整編碼序列，因此在多克隆位點根據閱讀框插入目的基因就可以表達C端含有DsRed標簽的融合蛋白。利用DsRed的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達水平和細胞內定位，也可以利用DsRed抗體來檢測或免疫沉淀融合蛋白。DsRed與GFP沒有序列同源性，不能使用GFP抗體檢測DsRed。

本質粒為卡那霉素抗性。

重組腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一種常見的用于在培養細胞或動物體內表達外源基因的重要工具。重組腺病毒具有感染宿主細胞范圍廣、感染不依賴細胞分裂、高滴度及目的基因表達水平高等特性。最常用的腺病毒載體是人類血清5型腺病毒。改造后的人類血清5型腺病毒，刪除了在病毒裝配過程中起關鍵作用的E1基因和非必須的能表達逃避宿主免疫的E3基因，E1和E3基因的刪除使得重組腺病毒不能自我復制，同時給外源基因的插入提供了空間，最長可插入7.5kb的外源基因。從而提高了重組腺病毒的的安全性和可操作性。再利用攜帶E1基因的AD-293、293A、HEK293等細胞作為包裝細胞就可以完成重組腺病毒的包裝。

pShuttle系列的穿梭質粒攜帶外源目的基因，經過Pme I線性化，隨后與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1(D8106)共轉化到大腸桿菌BJ5183中，或者轉化到已經預轉化了pAdEasy-1質粒的BJ5183菌株(D8107)中同源重組。BJ5183菌株表達recET基因，具有很高的基因同源重組(homologous recombination)活性，使帶有目的基因的穿梭質粒與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1通過末端反向重復序列同源重組，實現外源基因與腺病毒基因組的整合。將重組的攜帶外源基因的腺病毒質粒用Pac I線性化后轉染到AD-293、293A、HEK293等重組腺病毒包裝細胞中進行包裝。從而制備獲得高滴度、自我復制缺陷并且帶有目的基因的重組腺病毒。

目的基因引入時不能含有Pme I及Pac I這兩個酶切位點，如果含有該兩個酶切位點的目的基因，需要對該位點進行突變方可進行基因操作。

pShuttle-CMV-C-DsRed主要信息如下：

pShuttle-CMV-C-DsRed 質粒(8155bp)的圖譜如下：

pShuttle-CMV-C-DsRed質粒的詳細圖譜見說明書：https://www.beyotime.com/Manual/D8115 pShuttle-CMV-C-DsRed.pdf。

pShuttle-CMV-C-DsRed 中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-C-DsRed)包括：

pShuttle-CMV-C-DsRed 中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pShuttle-CMV-C-DsRed once)包括：

pShuttle-CMV-C-DsRed 質粒中推薦使用的測序引物序列如下：

forward primer (888-907): 5′GGTCTATATAAGCAGAGCTG3′

Reverse primer (1692-1714): 5′GTGGTATGGCTGATTATGATCAG 3′

pShuttle-CMV-C-DsRed的全序列信息:pShuttle-CMV-C-DsRed2.txt