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描述
Pierce BCA 蛋白定量試劑盒是一種雙組分、高精度、兼容去垢劑的蛋白定量試劑，可準確測定蛋白濃度。對于蛋白研究中的常見樣品類型，Pierce BCA 試劑均可準確測定蛋白濃度。Pierce BCA 試劑可用于評估全細胞裂解物、親和柱分離組分和蛋白樣品純化的產量，還可在工業應用中用于蛋白污染的監測。與大多數染料結合法相比，BCA蛋白定量法受蛋白質氨基酸組成差異的影響更小，因此有更高的蛋白間定量一致性。
BCA 蛋白定量試劑盒的特點包括：
?比色法測量—可以目測評估，也可使用標準分光光度計或酶標儀 (562 nm) 進行測量
??高度一致性—與染料結合法 (Bradford) 相比，BCA定量法的蛋白間差異更小
??兼容性強—在大多數離子型和非離子型去污劑的常見濃度下，性能不受影響
??定量時間—30 分鐘孵育；與傳統 Lowry 法相比，操作更簡單，且檢測速度快 4 倍
??檢測范圍—BSA 的線性工作范圍為 20 至 2000 μg/mL
??高靈敏度—使用增強方案，可檢測濃度低至 5 μg/mL 的樣品
測定工作原理
BCA 蛋白測定法是在堿性環境下，通過蛋白將 Cu2+?還原為 Cu1+?，再通過二辛可寧酸 (BCA) 來檢測亞銅陽離子 (Cu1+) 。第一步是銅與堿性環境中的蛋白質螯合，形成淺藍色復合物，這一過程被稱為雙縮脲反應。在該反應（雙縮脲反應）中，由三個或更多氨基酸殘基的肽在含酒石酸鈉鉀的堿性環境中與銅離子形成有色螯合復合物。
在顯色反應的第二步中，BCA 與第一步形成的還原型（亞銅）陽離子發生反應。兩分子 BCA 與一個亞銅離子螯合，產生深紫色反應產物。BCA/銅復合物是水溶性的，在 562 nm 處具有強線性吸收，且吸收度隨蛋白質濃度增加而升高。該復合物的靈敏度（檢測下限）大約是第一個反應中淡藍色的 100 倍。
反應很大程度上受到蛋白氨基酸序列中四個氨基酸殘基（半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸和色氨酸）的影響。然而，不同于考馬斯染料結合法，肽鏈也有助于顏色形成，因此可將不同蛋白間的測量差異降至最低