FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖
FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖是一類多糖衍生物，既帶游離伯胺和羧酸，也帶有熒光染料熒光素（FTIC）。賴氨酸是一種天然存在的氨基酸，在生物化學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域廣泛用于結(jié)合和固定。
FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖也被稱為Fluoro-emerald?或fluoroemerald ?。經(jīng)純化后，所有批次都需檢測(cè)分子量，取代度，干燥失重和游離FITC。FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖為黃色至橙色粉末，分子量范圍從4 kDa到500 kDa。
熒光素(FITC)是一種熒光明亮的染料，廣為使用，在493nm吸收。在520nm處發(fā)光。 高質(zhì)量的FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖具備:
- 優(yōu)異的分子量分布（多分散性低）
- 明亮的熒光
- 可用于細(xì)胞和組織的固定
- 易與染料或生物分子結(jié)合
- 完全水溶性，在溶液或保質(zhì)期內(nèi)具有穩(wěn)定性佳
結(jié)構(gòu)
FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖由來(lái)源于腸系膜明串珠菌的特征鮮明的葡聚糖組分合成。葡聚糖先用賴氨酸標(biāo)記，然后在溫和條件下使用FITC功能化，形成FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖。賴氨酸的取代度在0.005-0.03 (mol賴氨酸/mol葡萄糖)，而FITC的取代度為0.001-0.01 (mol FITC/mol 葡萄糖)。
圖 1. FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖的結(jié)構(gòu)式。賴氨酸主要和葡聚糖在賴氨酸的ε-還是α-氨基位置結(jié)合未明確。
賴氨酸葡聚糖 (or Dextran-lysine-fixable) 是由來(lái)自腸系膜白串珠菌的葡聚糖的特定片段通過(guò)賴氨酸標(biāo)記而合成的。然后用FITC在溫和條件下功能化得到FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖。經(jīng)純化，控制產(chǎn)品的分子量，外觀，溶解度，取代度，pH，游離賴氨酸和游離FITC。產(chǎn)品的分子量是由對(duì)應(yīng)的葡聚糖片段的相近分子量來(lái)確定的。例如，F(xiàn)ITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖4的分子量大約為4000 Da。實(shí)際分子量是通過(guò)GPC測(cè)定的。葡聚糖來(lái)源于腸系膜白串珠菌B-512F,由α-D-(1-6)線性葡聚糖組成， α-(1-3) 側(cè)鏈含量較低（2-5%）。葡聚糖的分子量范圍從4000 到500000，并且通過(guò)GPC，比旋，吸光率和其它參數(shù)嚴(yán)格控制質(zhì)量。
物理性質(zhì)
FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖是黃色至橙色粉末，極易溶于水或電解質(zhì)溶液中。FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖不溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑，例如乙醇，甲醇，丙酮，氯仿，乙酸乙酯等。 賴氨酸的取代度為0.005-0.03(mol賴氨酸/mol葡萄糖)。FITC的取代度是 0.001-0.01 (mol FITC/mol 葡萄糖)。 熒光素/FITC的最大激發(fā)波長(zhǎng)為493 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 520nm (圖2)。
圖2. FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖70在 pH 7.4 PBS溶液中(10 mg in 50 mL)的熒光圖譜。激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)493/516 nm。
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性
FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖的穩(wěn)定性研究之前未見(jiàn)諸報(bào)道。不過(guò)，但根據(jù)葡聚糖的性質(zhì)和賴氨酸與葡聚糖鏈的碳酰二胺化學(xué)鍵判斷，該物質(zhì)具有較好的穩(wěn)定性。FITC和賴氨酸之間的硫脲鍵是穩(wěn)定的。若容器密封完好，室溫干燥條件下，F(xiàn)ITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖可以穩(wěn)定保持6年。
應(yīng)用
攜帶氨基的葡聚糖，作為生物結(jié)合和活體固定的工具（1,2），對(duì)于科學(xué)界而言價(jià)值非凡。賴氨酸結(jié)構(gòu)中的游離氨基可以與激活的基團(tuán)以共價(jià)鍵結(jié)合，例如NHS酯或異*酸酯，或者，與羧酸通過(guò)常規(guī)的肽偶聯(lián)劑偶聯(lián)，例如DCC，HOBt 以及HATU。 細(xì)胞和組織固定，使組分保持“類活體態(tài)”，并保持細(xì)胞滲透性，允許抗體可以進(jìn)入細(xì)胞結(jié)構(gòu)內(nèi)，應(yīng)用舉例，用于顯微研究和免疫轉(zhuǎn)染。賴氨酸結(jié)合葡聚糖通過(guò)與固定劑反應(yīng)（本文使用的是甲醛或戊二醛），與類似蛋白質(zhì)和脂質(zhì)體的生物大分子形成共價(jià)交聯(lián)，使整個(gè)體系和葡聚糖固定。這個(gè)在分子成像定性或定量評(píng)估生物事件時(shí)，具有十分獨(dú)特的重要意義。如果沒(méi)有固定，在活體系統(tǒng)內(nèi)的這些結(jié)構(gòu)將迅速分散和分解。熒光素/FITC最大激發(fā)波長(zhǎng)為493 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 520nm 。
產(chǎn)品列表
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產(chǎn)品編號(hào)
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品名
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分子量(kDa)
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包裝
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FITC-lysine-dextran 4
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4
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10 mg
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5 mg
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FITC-lysine-dextran 10
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10
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10 mg
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50 mg
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FITC-lysine-dextran 70
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70
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10 mg
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50 mg
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FITC-lysine-dextran 500
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500
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10 mg
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50 mg
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參考文獻(xiàn)
1. (a) Henley JR, Krueger EW, Oswald BJ, McNiven MA, J Cell Biol (1998) 141:85-99;
2. (b) Fritzsch B, Christensen MA, Nichols DH; J Neurobiol. 1993 Nov; 24(11):1481-99;
3. (c) Fritzsch B., J Neurosci Methods (1993) 50:95-103.
4. Schmued, L., Kyriakidis, K., Heimer, L., Brain Res., 526, (1990) 127-134
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