?人可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒
產品別名： ? ?人可溶性E選擇素(sE-selectin)檢測試劑盒 ? ?
人可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒原理的簡要說明書：sE-selectin (可溶性E選擇素), 可溶性E-選擇素分子是由內皮細胞分泌或膜表面E-選擇素分子脫落形成。E-選擇素由內皮細胞表達，以受體配體的方式發揮作用，參與體內炎癥細胞的滾動、游走過程。受炎癥、缺血再灌注后氧自由基增多等多種刺激時，E-選擇素分子開始脫落可致使血漿中可溶性粘附分子水平提高。 ?
人可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。 ??
標本要求?
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
16μg/L ? ?5號標準品 ? ?150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
8μg/L ? ?4號標準品 ? ?150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
4μg/L ? ?3號標準品 ? ?150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
2μg/L ? ?2號標準品 ? ?150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1μg/L ? ?1號標準品 ? ?150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 ??
4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。?
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。?