Universal miRNA Cloning Linker (5′腺苷化3′封閉)，即通用miRNA克隆接頭(5′腺苷化3′封閉)或Universal miRNA Cloning Linker (5'adenylated, 3'blocked)，是一種常用于miRNA等3’端為羥基的RNA或3’端為羥基的單鏈DNA在克隆、高通量測序建庫或PCR檢測等時，在3’端添加的接頭。

本產品5′端腺苷?；?也稱5′端預腺苷?；?′端預腺苷化，5′ pre-adenylated或5′ pre-adenylation)，3′端氨基封閉，可以用于3’端為羥基的RNA的3’端接頭的添加。RNA連接酶可以識別“活化”的5′端腺苷?；谋井a品，在無需ATP存在的條件下，可將本產品的5′端與另外一條單鏈寡核苷酸的3′端羥基共價連接。利用5′端腺苷酰化，3′端封閉的本產品，加入RNA連接酶，在無需添加ATP的條件下，就能實現本產品5’端和目標序列3’羥基的特異性共價連接。例如和miRNA連接時，可以有效避免miRNA的自連、不同miRNA之間的連接、本產品的自連或本產品不同鏈之間的連接，而僅發生本產品5’端和miRNA 3’羥基之間的特異性連接。

本產品的電泳圖和連接效果圖請參考圖1。圖中可見，本產品條帶清晰，純度高，與5’端為磷酸化的序列相比有顯著的電泳遷移率差異(圖1A)；并且本產品使用T4 RNA ligase 2 (T4 Rnl2), truncated與ssRNA連接時，連接效率非常高(圖1B)。

圖1. Universal miRNA Cloning Linker Linker (5′腺苷化3′封閉)及其連接效果圖圖。圖A. 本產品5′-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3′ (AppDNA)與5′-pCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3′ (pDNA)的電泳對比圖。圖B. 本產品(AppDNA)與ssRNA使用T4 RNA ligase 2 (T4 Rnl2), truncated的連接效果圖。圖中可見本產品與ssRNA有非常高的連接效率。

本產品的寡核苷酸序列是：5′-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3′。本產品的序列同NEB公司的S1315S Universal miRNA Cloning Linker。

本產品以水溶液的形式存在，濃度為40ng/μl，即6.9μM。

用途：本產品可以應用于小RNA克隆、miRNA文庫構建。

本產品的1μg小包裝約通常可以進行8-17次連接反應，5μg中包裝約通?？梢赃M行40-85次連接反應。具體的連接反應次數和反應體系的體積和本產品的用量有關。

包裝清單：

保存條件：

-20℃保存，一年有效。-80℃保存，至少一年有效。

注意事項：

本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1.使用本產品與ssRNA的3’羥基末端連接推薦使用T4 TNA Ligase 2, truncated。也可以使用T4 TNA Ligase 2, truncated,K227Q，或T4 TNA Ligase 2, truncated,T4 TNA Ligase 2, truncatedKQ (R55K, K227Q)。
2.參考下表在冰浴中配制如下反應體系：

注意：
a.由于涉及RNA操作，需要嚴格按照RNA操作的規范進行，避免RNase污染，相關試劑和耗材需要經過DECP處理去除RNase或者確保是RNase free的。推薦在連接體系中添加RNase Inhibitor，以避免ssRNA或其連接產物的降解，盡管經測試我們發現在嚴格操作的情況下，不加RNase Inhibitor也不會導致ssRNA或其連接產物發生明顯降解。
b.進行連接反應時，如果樣品RNA比較珍貴，希望充分被連接，可以按照接頭和樣品RNA的摩爾比為2:1的比例進行連接；如果樣品RNA比較充裕，同時感覺本產品的成本偏高時，可以按照接頭和樣品RNA的摩爾比摩爾比1:1甚至1:2的比例進行連接反應，這樣可以很好地節省本產品。
c.如果同時進行多個連接反應，可以把上表中除ssRNA之外的所有溶液和酶提前預混合，然后再分裝到各反應管內。
3.連接反應：25℃, 孵育60min。為了使連接反應更加充分，可以適當延長連接反應時間。
4.終止反應：65℃，孵育15min。?