動物

從5周，10周，20周和30周齡C57BL / 6 N小鼠解剖腎臟，肝臟和脾臟。對于腎臟和脾臟，使用每種性別和年齡的2只小鼠。對于肝臟，使用每種性別和年齡的2至4只小鼠。對于子宮，使用了八只小鼠，所有這些小鼠都在100天左右。這些實驗得到了當地動物護理委員會（LAGeSo，德國柏林）和馬克斯·德爾布呂克分子醫學中心（MDC）動物福利官員的批準（編號X 9011/19）。

基質水凝膠

具有不同剛度的水凝膠（1 kPa，2 kPa，4 kPa，8 kPa，12 kPa和25 kPa）從Softwell，Matrigen，Matrigen Life Technologies，Brea，CA購買，用于質量控制（1 kPa，2 kPa，4 kPa，8 kPa，12 kPa和25 kPa;N = 1 到 3）。

組織制備

左腎和右腎分別從側中線分為兩個（圖）。3A），四個部分全部縮進。肝臟樣本取自左葉（圖）。四A）. 整個收獲脾臟用于實驗（圖）。4選擇并打開左子宮角（圖）。5答，B）。所有器官都經過清潔，去除器官表面可見的血液，脂肪，膜或血管，但避免損壞它們的實質。為了獲得平坦的表面，我們將所有樣品粘貼到直徑為6厘米的培養皿底部，并用蟲膠（Sigma）使外表面平整。將組織樣品浸入PBS（NaCl 4.0 M，KCl 137.0 M，Na2高原油40.01 米，千米2采購訂單40.0018米;酸堿度 7.4）。

納米壓痕

為了確定彈性特性，我們使用了位移控制的納米壓痕儀（Piuma;光學11，荷蘭阿姆斯特丹）。該設備采用套圈頂部懸臂探頭32，33施加負載并使用基于光纖的讀數同時測量壓痕深度（圖）。1A）. 我們使用半徑為 50 μm 且懸臂剛度為 0.5 N/m 的球形探頭。在每一系列實驗之前，通過壓入剛性表面并將懸臂彎曲等同于探頭位移來進行懸臂彎曲校準。之后，將探針聚焦在組織表面的適當區域（圖。1B、3A、4A、5A、6B）。在25×5 μm網格掃描中，將每個凝膠壓痕5次（800×800個基質），測量間隔距離為200 μm。腎臟、肝臟和脾臟樣品在9××3μm網格掃描中用3個壓痕（200個基質）壓進（圖。200B、3B、4B）。在子宮中，分別在子宮的近端、中部和遠端測試了 5 × 4 μm 網格中具有 100 個單壓痕的三個壓痕矩陣（圖）。100B，C）。應用的壓痕方案由在6 nm壓痕深度下4 s的加載階段（保持8000秒）和卸載階段4 s組成。所有掃描都進行了兩次，以分析可靠性。左右腎四個部分所有結果的平均值表示為腎臟彈性。凝膠、肝臟和脾臟的硬度表示為每次掃描中所有結果的平均值。三次掃描結果的平均值作為子宮硬度。所有單個壓痕值均由 Piuma Dataviewer 版本 2.2 （Piuma;光學11，荷蘭阿姆斯特丹）。