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多酚氧化酶(PPO）測(cè)試盒
品牌：Solarbio | 貨號(hào)：BC0190
- 檢測(cè)方法?: 可見(jiàn)分光光度法
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| 商品貨號(hào)： | 商品品牌： | 規(guī)格 | 基本售價(jià)： | 選擇規(guī)格 |
|---|---|---|---|---|
| BC0190-50管/24樣 | Solarbio | 50管/24樣 | 760.00元 | ? |
測(cè)定意義：PPO（EC1.10.3.1）主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。
測(cè)定原理：PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌，后者在525nm有特征光吸收。
需要的儀器，耗材:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體，60ml×1 瓶，4℃保存，用前混勻；
試劑一：液體，40ml×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體，10ml×1 瓶，4℃保存；
操作步驟：
一、 粗酶液提取 ：
1. 收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 200 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 400μl 提取液，超
聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次） ；8000g 4℃離心 10 分鐘，
取上清，置冰上待測(cè)。
2. 稱(chēng)取約 0.2g 組織，加入 1ml 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待
測(cè)。
二、 測(cè)定操作表：
冷卻后，5000g，常溫離心 10min，收集上清，用蒸餾水調(diào)零，410nm 處檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管吸
光度。
注意:每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)置一個(gè)對(duì)照管,可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進(jìn)
行 1min 沸水浴處理
PPO ?活 性 計(jì)算：
1、組織中 PPO 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每分鐘每 mg 組織蛋白在每 ml 反應(yīng)體系中使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一個(gè)酶
活力單位。
PPO （U/mg prot） = V 反總×V 樣總÷V 樣÷T÷0.01× （A 測(cè)定-A 對(duì)照） ÷Cpr=60× （A 測(cè)定-A 對(duì)照） ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每分鐘每 g 組織蛋白在每 ml 反應(yīng)體系中使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一個(gè)酶活
力單位。
PPO（U/g 鮮重）= V 反總×V 樣總÷V 樣÷T÷0.01×（A 測(cè)定-A 對(duì)照）÷W=60×（A 測(cè)定-A 對(duì)照）÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 PPO 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每分鐘每 mg 組織蛋白在每 ml 反應(yīng)體系中使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一個(gè)酶
活力單位。
PPO （U/mg prot） = V 反總×V 樣總÷V 樣÷T÷0.01× （A 測(cè)定-A 對(duì)照） ÷Cpr=60× （A 測(cè)定-A 對(duì)照） ÷Cpr
（2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每分鐘每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每 ml 反應(yīng)體系中使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一
個(gè)酶活力單位。
PPO（U/10 4 cell）= V 反總×V 樣總÷V 樣÷T÷0.01×（A 測(cè)定-A 對(duì)照）÷細(xì)菌或細(xì)胞密度（10 4 /mL）
=60× （A 測(cè)定-A 對(duì)照） ÷細(xì)菌或細(xì)胞密度 （10 4 /mL） =60× （A 測(cè)定-A 對(duì)照） ÷細(xì)菌或細(xì)胞密度 （10 4 /mL）
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.9mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.15 mL；V 樣總：加入提取
液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，0.2g.
注意事項(xiàng)：不同樣本的多酚氧化酶最佳的反應(yīng)溫度略有差別，可在 25-37℃之間進(jìn)行調(diào)節(jié)。
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