【產品名稱】

通用名稱：炭疽桿菌檢測試劑盒（實時熒光PCR法）

英文名稱：Bacillus anthraci Detection?Kit (Dual Channel?Real-Time PCR Method)

【包裝規格】?25T/盒?＆?50T/盒

【預期用途】

本試劑盒利用Taq-man實時熒光PCR原理，定性篩查檢測炭疽桿菌，對疾病診斷、醫治療效及醫院環境評估有重要指導意義。

【檢驗原理】

本試劑盒針對炭疽桿菌基因設計特異性引物和探針，在反應體系中含有炭疽桿菌DNA模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。

【主要組成成份】

注：陰性對照為不含炭疽桿菌核酸的其它菌的混合物，陽性對照為炭疽桿菌經滅活處理的核酸提取物。

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列?、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1. 如使用原始標本進行檢測，標本（膿液、血液、咽拭子、菌落、菌苔等）應為新鮮采集并使用雙蒸滅菌水或滅菌生理鹽水懸浮的原始標本。

2. 標本收集后若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-20℃～-80℃。

3. 標本保存期間應避免反復凍融。

【檢驗方法】

1.?試劑準備（試劑準備區）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

（2）核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數

(3)在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

(4) 蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉移至樣本處理區。?剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準備（樣本處理區）

用QIAGEN、Roche公司DNA提取試劑盒提取DNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl、終體積25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。

4.PCR（PCR擴增區）

（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。

（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增。