色譜填料又稱層析介質(zhì)，指填充在色譜柱中具有納米孔道結(jié)構(gòu)的微球材料，粒徑一般在微米尺度，納米孔道的孔徑大小在5-200 nm范圍內(nèi)。色譜填料的形貌、結(jié)構(gòu)、粒徑大小和分布、孔徑大小和分布、基質(zhì)及表面功能基團(tuán)等都影響著色譜填料的性能，其中基質(zhì)影響著色譜填料的各種物理性能，比如機(jī)械強(qiáng)度、載量等，表面功能基團(tuán)則影響著分離模式和分離選擇性，即色譜填料的使用方向。色譜填料根據(jù)分離模式可分為預(yù)活化層析填料、凝膠過濾層析填料、疏水層析填料、離子交換層析填料、親和層析填料和多模式層析填料等。
預(yù)活化層析填料可以偶聯(lián)一個(gè)特定的配基，制備成一個(gè)可以純化一種或者幾種目標(biāo)分子的親和填料。例如，可以使用抗體、抗原、酶、受體、小的核酸或者多肽作為配基，純化能與它們結(jié)合的相應(yīng)的配體。
BioToolomics開發(fā)了多種預(yù)活化層析填料，可以高效、快速、簡便、安全地偶聯(lián)各種功能配體。預(yù)活化填料的基質(zhì)是由瓊脂糖制成的，具有親水性強(qiáng)、非特異性吸附低的特點(diǎn)，并且基質(zhì)已被高度交聯(lián)，具有很高的機(jī)械強(qiáng)度。
制備預(yù)活化親和層析柱的注意要點(diǎn)：
（一）配基的選擇
通常情況下，當(dāng)配基分子量＜5 KDa時(shí)，需要間隔臂；對于大分子配基，間隔臂不是必須的選擇條件。例如，NHS活化瓊脂糖層析填料有一個(gè)長間隔臂（11個(gè)原子），特別有助于固定結(jié)構(gòu)受限的配體。而CNBr則沒有間隔臂，對于小分子配基（＜5KDa），當(dāng)配基和樣品結(jié)合的時(shí)候，由于CNBr沒有間隔臂，可能會由于空間位阻而影響結(jié)合。因此當(dāng)配基分子量＜5 KDa時(shí)，建議使用NHS活化配基填料。對于大于5KDa的配基，二者差異不大。
（二）偶聯(lián)方法的選擇
配基是通過其功能基團(tuán)的反應(yīng)偶聯(lián)到基質(zhì)上，所以偶聯(lián)方法的選擇取決于配基的特性。NHS、羧基、CNBr、醛基活化瓊脂糖填料通過配基的伯胺基團(tuán)進(jìn)行偶聯(lián)，這幾種最主要的區(qū)別是NHS和羧基含有間隔臂，而CNBr和醛基沒有間隔臂，此外，NHS和羧基能耐受較高的pH值。環(huán)氧活化瓊脂糖填料可通過與羥基形成的穩(wěn)定醚鍵固定糖和其他碳水化合物，它們也可用于偶聯(lián)含伯胺或含硫醇的分子。肼活化瓊脂糖層析填料通過形成穩(wěn)定的腙鍵偶聯(lián)含醛或酮的配體。
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