干細胞是一種未充分分化，具有自我復制能力的多潛能細胞，在一定誘導條件下，可以分化為成骨細胞、成軟骨細胞和成肌細胞等，還可以分化為巨噬細胞、脂肪細胞、內皮細胞和成纖維細胞等骨髓基質細胞，具有發育為骨、軟骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基質等中胚層組織的潛能。

簡言之，干細胞體外定向誘導分化就是選擇適當的誘導劑和誘導方法，通過誘導劑與細胞表面受體結合或使細胞發生輕度可逆性損傷等，使被誘導細胞按預定的細胞類型方向分化，然后將這些定向分化的細胞進行分離和培養傳代，從而得到人們所需要的細胞類型。一般的，成骨分化和成脂分化是間充質干細胞MSC必要的功能性鑒定指標。成骨分化經茜素紅染色法鑒定，成脂分化經油紅O染色法鑒定。

Solarbio新增了成骨/成脂誘導迷你化合物Kit，每種Kit均由對應種類經典的可用于誘導的基礎試劑、用于鑒定與分析的高品質染料以及相關試劑組成，具有良好的生物活性?？蛻粢部梢愿鶕约旱膶嶒炐枨髣h減或添加其他的化合物，也可靈活定制專屬Kit，所有組分均已經過NMR、HPLC或MS檢測，以確?；衔锛兌群蜏蚀_性。

產品說明

IK-OIN-1 成骨誘導小分子化合物Kit?

IK-LIN-1 ?成脂誘導小分子化合物Kit

基本操作（僅供參考）

1.?接種骨髓間充質干細胞

取對數生長期的細胞，按照2×10⁴cells/cm²的細胞密度接種至包被后的培養器皿中，于37℃，5% CO₂培養環境下培養至相應的融合度（成骨誘導：60~70%；成脂誘導：90~100%），棄掉上清，加入成骨誘導分化培養基（含有地塞米松、維生素C、茜素紅等）或成脂誘導分化培養基（含有地塞米松、胰島素、吲哚美辛和IBMX）。

2.?細胞分化誘導

成骨誘導：每2~3天更換誘導培養基，于37℃，5%CO₂培養環境下培養，并注意觀察細胞形態變化（一般約14~28天左右）。根據細胞鈣鹽結晶析出和鈣質結節形成的情況，決定終止細胞誘導的時間，進行后續固定和染色鑒定（茜素紅染色）。

成脂誘導：于37℃，5%CO₂培養環境下培養約2~3天，更換為成脂誘導分化培養基維持液（只含有胰島素）培養1天。按照以上換液頻率繼續誘導（一般是3個循環，約14天左右），并注意觀察細胞形態變化。根據細胞誘導形成的脂滴數量和大小，決定終止細胞誘導的時間，并進行后續固定和染色鑒定（油紅O染色）。

3.?細胞固定

吸去培養基，使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性甲醛溶液覆蓋培養器皿底面，室溫固定30~60 min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。

4.?染色鑒定

加入適量的染色工作液，染色合適的時間（茜素紅：3~5min；油紅O：靜置染色30min），吸去染液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細胞干燥。

5.?誘導評估與分析

顯微鏡下觀察染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，成骨誘導后的鈣質結節會與茜素紅染料結合后呈現紅色或橘紅色。成脂誘導后的脂滴會與油紅O染料結合后呈現紅色或橘紅色。

對于成骨誘導還可以進行半定量分析，上述顯微觀察結束后，棄上清，加入氯化十六烷基吡啶溶液，室溫下孵育15~60min溶解礦化結節（茜素紅），然后在562 nm處檢測上清的OD值。

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