?1.細胞的準備：
使用適合進行化學發光檢測的96孔板，每孔接種100μl細胞(如使用384孔板，每孔接種25μl細胞，具體用量視不同類型的384孔板而定)，并確保檢測時每孔的細胞數量在5萬個以內(如使用384孔板宜控制在1萬個以內)，同時設置不含細胞的培養液孔作為陰性對照，按照細胞培養的常規方法培養細胞。如有需要，可加入藥物處理細胞。此外，如有必要，也可以設置細胞的濃度梯度，以便后續確定試劑盒的使用效果。
2.ATP標準曲線的設置(選做)：
把自備的ATP標準溶液用PBS或細胞培養液稀釋成適當的濃度梯度。初次檢測可以設置0、10、30、100、300、1000、3000、10,000nM這幾個濃度，96孔板每孔加入100μl 的標準品。如有必要，在后續的實驗中可以根據細胞中的ATP含量對標準品的濃度范圍進行適當調整。如果用細胞培養液來稀釋ATP標準品，稀釋后需立即進行后續的發光檢測，否則培養液中的ATPase等可以消耗ATP的酶會導致ATP含量下降。
3.檢測試劑的準備：
a.融解凍存的CellTiter-Lumi? Steady Plus發光法檢測試劑，如有必要可適當分裝該試劑。經測試反復凍融5次對其檢測效果無顯著影響。
b.按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量，取適量CellTiter-Lumi? Steady Plus發光法檢測試劑，平衡至室溫。
4.細胞活力檢測：
a.取出細胞培養板在室溫平衡10分鐘(通常不宜超過30分鐘)。
b.96孔板每孔加入100μl CellTiter-Lumi? Steady Plus發光法檢測試劑(384孔板每孔25μl)。
c.室溫振蕩2分鐘，以促進細胞的裂解。
d.室溫(約25℃)孵育10分鐘，使發光信號趨于穩定。
e.使用具有檢測化學發光功能的多功能酶標儀進行化學發光檢測。請根據儀器要求設置相應的參數，每個孔的檢測時間一般為0.25-1秒或更長時間，具體需根據儀器的檢測靈敏度進行適當的調整。
f.根據化學發光讀數直接計算細胞的相對活力，或根據ATP標準曲線計算出ATP的量從而計算出細胞的相對活力。對于培養細胞和ATP標準品的檢測效果可以參考圖1和圖3，細胞在0-50,000個細胞/孔的細胞密度范圍內有良好的線性關系，ATP標準品0-10,000nM濃度范圍有良好的線性關系。注：檢測效果因細胞的種類不同而有所不同，對于一些ATP含量特別高的細胞，在細胞數量達到50,000個后可能會不呈現線性相關，但化學發光讀數還是會繼續升高的。

圖3. CellTiter-Lumi? Steady Plus發光法細胞活力檢測試劑盒(CTL Steady Plus)對ATP標準品的檢測效果。實際檢測效果會因檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。
常見問題：
1.Luminometer和熒光分光光度計有何不同？
熒光分光光度計檢測的樣品本身不能發光，樣品需要由特定波長的激發光激發，然后才能產生熒光并被熒光分光光度計檢測。Luminometer檢測的樣品本身可以發光，不需要激發光進行激發。也就是說luminometer是檢測化學發光(螢光)的儀器。有些型號的熒光分光光度計也具有luminometer的功能，即也可以檢測化學發光。您所使用的熒光分光光度計能否用于化學發光的測定請仔細閱讀該儀器的說明書。
2.可以進行螢光素酶報告基因檢測的儀器是否就可以用于本試劑盒的檢測？
是。螢光素酶報告基因的檢測原理和本試劑盒的原理相同，可以用相同的儀器測定。