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聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒說明書
????????????????????Cat.?No.?????????????????????YJ0526
????????????????????Kit?Size????????????????????????50
????????????????????Buffer?PL?????????????????????100?ml
????????????????????Diffusion?Buffer??????????????30?ml
????????????????????Buffer?PS?????????????????????15?ml
????????????????????Buffer?PW（concentrate）????????10?ml
????????????????????Buffer?EB?????????????????????10?ml
????????????????????Spin?Column?DM??????????????????50
????????????????????Filter??????????????????????????50
????????????????????Collection?Tube（2?ml）??????????100
??????????????本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途??
產品簡介
本試劑盒采用新型硅基質膜及特殊的緩沖液系統，高效專一結合??DNA，可從聚丙
烯酰胺凝膠中高效回收?DNA，并可最大限度去除引物、酶、礦物油等雜質，獲得高純
度的DNA，滿足多種實驗要求。本試劑盒可回收50?bp-50?kb的DNA片段，能有效避免
大片段DNA在純化過程中被切斷，每個吸附柱可最高吸附20?μg的DNA，且DNA回收效率高達90%。由本試劑盒回收純化的DNA可直接用于酶切，連接，PCR擴增、DNA測
序等分子生物學實驗。
自備試劑：無水乙醇，離心管。
實驗前準備及重要注意事項
1．第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer?PW中加入無水乙醇。
2．使用前請檢查Buffer??PL是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在37℃
???水浴幾分鐘，即可恢復澄清。
3．電泳時最好使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
4．切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷。
5．回收率與初始DNA量和洗脫體積有關。
6．離心步驟均為使用常規臺式離心機室溫下進行離心。
操作步驟
1．將單一的目的DNA條帶從聚丙烯酰胺凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的
???離心管（自備）中，稱取重量。
2．將凝膠充分搗碎，向凝膠中加入1-2倍體積的Diffusion??Buffer（如100mg凝膠加入
???100-200?μl?Diffusion?Buffer），75℃孵育30分鐘。
3．12,000??rpm（~13,400×g）離心1分鐘，小心吸取上清，將之加入到已裝入收集管的
???Filter（過濾柱）中，12,000?rpm離心1分鐘，將離心所得的濾液收集在收集管中。
4．向濾液中加入3倍體積的Buffer?PL；當回收的目的片段<100?bp時，加入6倍體積的
???Buffer?PL，上下顛倒混勻。
???注意：此時可以檢測其pH值，若pH值大于7.5，可向含有DNA的膠溶液中加10-30?μl?的3?M醋酸鈉（pH?5.0）將pH值調到5-7。
5．柱平衡：向已裝入收集管（Collection?Tube）中的吸附柱（Spin?Column?DM）中加
???入200?μl?Buffer?PS，12,000?rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新
???放回收集管中。
6．將步驟4中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000?rpm
???離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
???注意：吸附柱容積為700?μl，若樣品體積大于700?μl可分批加入。
7．向吸附柱中加入650?μl?Buffer?PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000
???rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
???注意：如果純化的DNA?是用于鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議加入Buffer?PW后靜置2-5分鐘再離心。
8．將吸附柱放回收集管中，12,000?rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置
???于室溫數分鐘，以徹底晾干。
???注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、
???PCR等）。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。
9．將吸附柱放到一個新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加??20?μl?Buffer
???EB，室溫放置2分鐘；??12,000?rpm離心2分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
???注意：1）洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調到此范圍）。
???2）為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回吸附柱中，重復步驟9。
???3）洗脫體積不應小于20?μl，體積過少影響回收效率。
???4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續的酶促反應。
???5）回收大于10??kb的DNA片段時，Buffer??EB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。
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