?【原理】
蠶（Bombyx mori）的體液內(nèi)存在著被稱為酚氧化酶前體（ProPO）級(jí)聯(lián)的生物防御機(jī)制，通過(guò)與肽聚糖（PG）以及（1→3）-β-D-葡聚糖（β-葡聚糖）反應(yīng)，最終使酚氧化酶前體（ProPO）活性化為酚氧化酶（PO）。目前已闡明的PO的活化機(jī)制是包含多種絲氨酸蛋白酶活化的級(jí)聯(lián)機(jī)制。目前認(rèn)為該級(jí)聯(lián)機(jī)制在異物入侵昆蟲體內(nèi)時(shí)所觀察到的黑色素形成現(xiàn)象起著重要的作用
本SLP試劑采用蠶的體液經(jīng)無(wú)菌提取、制備而成的凍干試劑，包含酚氧化酶級(jí)聯(lián)中全部的因子。本試劑通過(guò)被肽聚糖以及β-葡聚糖所活化，從而氧化反應(yīng)底物DOPA（L-3,4-二羥基苯丙氨酸），最終生成黑色素。由于大多數(shù)細(xì)菌的細(xì)胞壁存在肽聚糖、β-葡聚糖也存在于多種真菌的細(xì)胞壁中，因此利用生成的黑色素作為指標(biāo)，可檢測(cè)出細(xì)菌、真菌。
SLP試劑的活性化機(jī)制如圖1所示。肽聚糖或β-葡聚糖分別與其識(shí)別蛋白（PGRP與βGRP）結(jié)合，引發(fā)酚氧化酶級(jí)聯(lián)，最終使PO活化。活性化后的PO可氧化底物中的DOPA，最終生成黑色素。
圖1.? 蠶血酚氧化酶前體級(jí)聯(lián)反應(yīng)
肽聚糖不僅存在于革蘭氏陽(yáng)性菌，也存在于革蘭氏陰性菌中。不管是陽(yáng)性還是陰性的革蘭氏菌，SLP試劑對(duì)一般細(xì)菌均產(chǎn)生反應(yīng)。此外，SLP試劑也會(huì)對(duì)真菌來(lái)源的β-葡聚糖起反應(yīng)，因此SLP試劑可作用于細(xì)菌、真菌類的微生物。
SLP試劑雖然會(huì)對(duì)來(lái)源于各類細(xì)菌的肽聚糖和帶有β-1,3-糖苷鍵的β-葡聚糖產(chǎn)生強(qiáng)烈反應(yīng)，但幾乎不與作為革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁成分的脂多糖（內(nèi)毒素）發(fā)生反應(yīng)。能被LAL試劑（鱟試劑）檢測(cè)出的內(nèi)毒素不會(huì)使SLP的級(jí)聯(lián)機(jī)制活化，而SLP試劑能檢測(cè)無(wú)法被鱟試劑檢測(cè)出的肽聚糖。因此聯(lián)合鱟試劑與SLP試劑一起使用，可對(duì)檢測(cè)材料中的微生物種類進(jìn)行預(yù)測(cè)。
【特點(diǎn)】
● 配合內(nèi)毒素檢測(cè)儀Toxinometer?，可準(zhǔn)確、高靈敏度地定量肽聚糖和β-葡聚糖
【應(yīng)用實(shí)例】
● 檢測(cè)醫(yī)藥制品、生物制劑、基因工程制品等中的細(xì)菌、真菌。
● 檢測(cè)人工透析液，防止被微生物污染
● 作為水質(zhì)污染的指標(biāo)
● 用于肽聚糖相關(guān)的構(gòu)效關(guān)系、生物合成、代謝、病因生成的研究；
● 用于昆蟲生物防御反應(yīng)機(jī)制的研究
【試劑盒組成】
| 1.SLP-HS Reagent II ? 靈敏度：10 pg/mL（肽聚糖），1 pg / mL（β-葡聚糖） |
0.1 mL用×20瓶 |
| 2.SLP-Diluent（SLP溶解液） | 5 mL×2瓶 |
| 3.Standard（標(biāo)準(zhǔn)溶液） | 0.5 mL×1瓶 |
※ 來(lái)源于Staphyrococcus aureus的可溶性肽聚糖標(biāo)準(zhǔn)品，用于細(xì)菌檢測(cè)。
如需進(jìn)行真菌檢測(cè)，可另行購(gòu)買凝膠多糖標(biāo)準(zhǔn)品（產(chǎn)品編號(hào)：030-09903）
【測(cè)定方法】
通過(guò)使用內(nèi)毒素檢測(cè)儀Toxinometer?，可定量檢測(cè)肽聚糖以及β-葡聚糖。內(nèi)毒素檢測(cè)儀Toxinometer? 可檢測(cè)由SLP試劑活化生成的色素所引發(fā)的吸光度的變化，當(dāng)吸光度達(dá)到預(yù)設(shè)的閾值時(shí)的反應(yīng)時(shí)間被稱為活化時(shí)間（Ta）。Ta可作為SLP活化物質(zhì)（肽聚糖、β-葡聚糖）的定量指標(biāo)。檢測(cè)原理請(qǐng)見(jiàn)圖2，使用內(nèi)毒素檢測(cè)儀Toxinometer? 的測(cè)定示例請(qǐng)見(jiàn)圖3。
圖2.?檢測(cè)原理
利用Toxinometer??測(cè)量從反應(yīng)開(kāi)始到吸光度R(t)到達(dá)預(yù)設(shè)閾值（Rth）時(shí)的反應(yīng)時(shí)間（Ta），利用不同濃度的肽聚糖、β-葡聚糖對(duì)應(yīng)不同的Ta值來(lái)進(jìn)行定量。
圖3. 內(nèi)毒素檢測(cè)儀Toxinometer??的測(cè)定示例