? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?細胞鋪板不均勻？3招鋪遍天下板子無敵手！

為什么把細胞鋪均勻就那么的難?什么米字法、十字法、螺旋法、還有搖板子要拿起來搖、 或者一定要放在臺子上磨（那種板子與臺子摩擦出來尖銳的聲音...... 最后放進孵箱之前,還生怕幾步路搖壞了才鋪好的板子........）五花八門.

不過大多數技巧其實并沒有太大的用處，本文總結最實用的細胞鋪板的3種手法技巧，有了這些手法，細胞鋪均勻不是事兒！

首先，細胞鋪板不均勻分為三種情況：

1.中間多，周圍少

2.中間少，四周多

3.一坨一坨成塊

到底該怎么拯救呢？

手法一：均勻單層

要鋪成那種很均勻的單層細胞，手法如下：

1.細胞板子先加入一定量(一般是總量培養基的1/5)的培養基，放入孵箱中放置10-20min。

2.在滴入細胞時，細胞板子與通風櫥有一定的角度，沿著板壁的孔邊緣滴入。

3.滴入后，呈“8”字方法搖晃5-8次。

4.置于水平臺上，放置10-20分鐘

5.放入孵箱。

在細胞鋪板時，每一種板子的孔面積有多大，培養的液體量以及加入細胞量參考下圖.

手法二：中間少，周圍多

其實細胞鋪板不一定都需要單個單個的那么均勻，比如，做免疫熒光時可以鋪中間少，周圍稍多的板子，同時檢測到單個細胞的形態，另外又可以照一點低倍的用作于統計，所有的細胞都在一個環境中。

特別說明一下：這里的多也只是相對于多，細胞也是單層的。

中間

四周

要鋪這樣的細胞樣子，那鋪細胞時要注意手法了：

1.細胞板子不需要提前用培養基潤洗，直接從邊上滴入混有細胞的培養基。

2.放置30s-1min后，前后搖晃5-8次。

3.放在水平臺上靜置2-5min。

4.放入孵箱。

手法三：中間多，周圍少

一般在提取蛋白或者提取RNA的時候有時會這樣鋪板，因為有些細胞刮刀不好用，沒有辦法刮到周圍的，想要鋪中間多，周圍少的板子，手法如下：

1.細胞板子不需要提前潤洗，從中間滴入進去后。

2.把板子朝一個方向順時針或者逆時針旋轉3-5圈。

3.水平臺上靜置2-5min。

4.放入孵箱。

想要細胞鋪板鋪得好，背景知識很重要。在鋪細胞的時候，需要準確的知道所養細胞的特性，比如：

1.細胞的名稱，來源。

2.細胞的屬性。

3.細胞分裂時間。

最主要的是要搞清楚細胞的生長曲線，推斷鋪板后多久可以到達什么細胞密度。

細胞鋪板后，細胞狀態不好怎么辦？

建議從以下幾個方面考慮一下原因：

1.用來鋪板的細胞狀態本身就不好。

2.用來鋪板的細胞傳代次數太多，有些老化。

3.胰酶消化時間過長。

4.中和的血清量及時間不夠。

5.支原體污染。

細胞鋪板是一個經驗積累的過程，手法也需要積極的改進，不要生搬硬套，也不要一味追求絕對的鋪均勻，在實驗過程中多思考細胞本身的特征和屬性，出現問題積極解決。