【產品名稱】

通用名稱：豬流感病毒（通用型）檢測試劑盒（實時熒光PCR法）

英文名稱：Swine Influenza Virus?Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規格】 25T/盒 & 50T/盒

【預期用途】

本試劑盒利用實時熒光PCR原理，定性檢測豬流感病毒，對豬流感病毒引起的流感及其并發癥的診斷及療效評估有重要指導意義。

【檢驗原理】

本試劑盒針對豬流感病毒的高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含豬流感病毒基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。

【主要組成成份】

注：陰性對照為豬基因組DNA，陽性對照為失去活性的SIV病毒cDNA。

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1.取咽喉拭子和鼻拭子，采集方法如下：

(1) 咽喉拭子，采取時要將拭子深入喉頭及上顎裂來回刮3次～5次，取咽喉分泌液；

(2) 鼻拭子，將拭子深入鼻腔及周圍圈沾取分泌液；

(3) 將咽喉拭子和鼻拭子一起放入有 1.0 mL 生理鹽水的離心管中備用；

（4）理想情況下標本應使用頭部為合成纖維的拭子，用鋁或塑料做桿。不推薦棉拭子和木桿。

2.血液或血清樣品：使用無菌注射液抽取樣品置于離心管中待檢。

3.標本采集管應包含含有蛋白穩定劑的病毒運輸液。

4.應避免標本間交叉污染。

5.標本收集后可立即檢測；若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-80℃以下，避免反復凍融。

【檢驗方法】

1.?試劑準備（試劑準備區）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

（2）核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數

?(3)在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

2.樣本準備（樣本處理區）

用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。

4. PCR（PCR擴增區）

（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。

（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增。