堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)
品牌：Solarbio | 貨號：G1480
產(chǎn)品組成
自備材料
1、載玻片、濕盒?
2、普通光學(xué)顯微鏡?
產(chǎn)品介紹
堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱 ALP 或 AKP)為一類***酶，廣泛分布于哺乳動物組
織內(nèi)，其活性所需最適 pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜)，如腸上皮和腎近曲
小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動脈和毛細(xì)血管動脈部之內(nèi)皮，還見于
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。?
堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶
聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法)，其原理是在 pH9.2～9.8 的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使 AB-BI 磷酸
鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液可用于血
液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色，堿性磷酸酶活性部
位呈藍(lán)色，位于胞槳，結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。?
操作步驟（僅供參考）
一、 涂片或切片?
1、 血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無
需固定)，水洗。?
2、 滴加配制好的 ALP 孵育液，放入濕盒中，避光孵育 15～20min，水洗。?
3、 入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染 3～5min。?
4、 水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。?
二、 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
?1、 取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細(xì)胞，棄液，PBS清洗干凈
?2、 加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。
?3、 滴加配制好的 ALP 孵育液，放入濕盒中，避光孵育 15～20min，PBS 清洗。
?4、 入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染 3～5min。
?5、 PBS 清洗、鏡檢。?
染色結(jié)果：
?ALP 活性部位 藍(lán)色?
細(xì)胞核 紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)?
血液、骨髓涂片
結(jié)果判斷：?
一般以積分報(bào)告結(jié)果，根據(jù) 100 個(gè)中性粒細(xì)胞陽性顆粒進(jìn)行 0-4 計(jì)分。?
細(xì)胞分值?
染色特點(diǎn)?
?0 無顆粒
?1 稍有顆粒
?2 中等程度顆粒
?3 多數(shù)顆粒
?4 充滿顆粒
注意事項(xiàng)
?1. 血液或骨髓細(xì)胞涂片或其他樣本均應(yīng)新鮮，薄厚適宜，及時(shí)固定，否則會影響酶的活性。
?2. 培養(yǎng)細(xì)胞染色操作過程中，清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微，以免損傷或丟失細(xì)胞。
?3. ALP 孵育液易失效或降低陽性強(qiáng)度，即配即用，不宜久置。
?4. 復(fù)染時(shí)，核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。
?5. 每次染色時(shí)，應(yīng)有陽性對照片。