堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)
品牌：Solarbio | 貨號：G1480
產品組成
自備材料
1、載玻片、濕盒?
2、普通光學顯微鏡?
產品介紹
堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱 ALP 或 AKP)為一類***酶，廣泛分布于哺乳動物組
織內，其活性所需最適 pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲
小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內皮，還見于
內質網、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。?
堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶
聯法(又稱同時偶聯法)，其原理是在 pH9.2～9.8 的堿性條件下，細胞內堿性磷酸酶可使 AB-BI 磷酸
鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯重氮鹽生成有色產物，定位于細胞質中。該染液可用于血
液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色，堿性磷酸酶活性部
位呈藍色，位于胞槳，結果較金屬鹽沉淀法可靠。?
操作步驟（僅供參考）
一、 涂片或切片?
1、 血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無
需固定)，水洗。?
2、 滴加配制好的 ALP 孵育液，放入濕盒中，避光孵育 15～20min，水洗。?
3、 入核固紅染色液或甲基綠染色液復染 3～5min。?
4、 水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。?
二、 貼壁培養細胞
?1、 取6孔板或其他容器培養的細胞，棄液，PBS清洗干凈
?2、 加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。
?3、 滴加配制好的 ALP 孵育液，放入濕盒中，避光孵育 15～20min，PBS 清洗。
?4、 入核固紅染色液或甲基綠染色液復染 3～5min。
?5、 PBS 清洗、鏡檢。?
染色結果：
?ALP 活性部位 藍色?
細胞核 紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)?
血液、骨髓涂片
結果判斷：?
一般以積分報告結果，根據 100 個中性粒細胞陽性顆粒進行 0-4 計分。?
細胞分值?
染色特點?
?0 無顆粒
?1 稍有顆粒
?2 中等程度顆粒
?3 多數顆粒
?4 充滿顆粒
注意事項
?1. 血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應新鮮，薄厚適宜，及時固定，否則會影響酶的活性。
?2. 培養細胞染色操作過程中，清洗、染色等步驟都應輕微，以免損傷或丟失細胞。
?3. ALP 孵育液易失效或降低陽性強度，即配即用，不宜久置。
?4. 復染時，核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。
?5. 每次染色時，應有陽性對照片。