?描述：
無表面活性劑動物細胞/組織總蛋白提取試劑盒，由優化細胞裂解液和離心管柱及 2.0ml?接收管組成， 能夠快速從動物細胞（昆蟲/哺乳動物/其他培養細胞）和組織（無脊椎動物和脊椎動物）中提取總蛋白。蛋白提取緩沖液中不含任何表面活性劑和 EDTA。試劑盒使用離心管柱**技術，樣品量最小可處理 20ul，最大可達 500ul，解決了用戶起始原料限制的因素。操作時間小于 5?分鐘，產率可到 1-5?mg/ml。
緩沖液配方：非公開
應用：
可應用于蛋白質組學研究(LC/MS), IP, ELISA，2D 分析，等電聚焦，SDS-PAGE，immunoblottings 及其他應用。試劑盒提供了一個非?？焖僦苽涓邼舛瓤偟鞍椎姆椒āＳ捎诘鞍桩a量高，且低鹽濃度，提取出的蛋白無需脫鹽和濃縮，即可直接用于下游應用。緩沖液配方：非公開
試劑盒組分
- 15ml?緩沖液A
- 15ml?緩 沖 液 B
- 50?個離心管柱
- 50?個收集管
- 4 根塑料研磨棒
儲存：
儲存于 4℃重要產品信息
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?無表面活性劑動物細胞/組織總蛋白提取試劑盒可以快速提取總蛋白，因此蛋白酶抑制劑不是必須加入，但是如果下游實驗需要較長時間或者蛋白提取后保存較長時間，建議在Buffer?A?中添加蛋白酶抑制劑。推薦使用BCA（Pierce）試劑盒用于蛋白濃度測定。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應在使用前加入 Buffer?A 中。
所需附加材料
1XPBS
渦旋震蕩儀臺式離心機
BCA 蛋白定量試劑盒（Pierce, Cat # :23227）
操作方法：
細胞樣品總蛋白提取- 非貼壁細胞
- 蛋白提取前，將Buffer 和離心管柱及接收管套管放在冰上預冷。
- 低速離心收集細胞，在離心管中加入 1ml?預冷的 PBS,3000rpm?離心 2-3?分鐘清洗細胞。吸去上清，剩余與細胞體積相同體積的PBS。渦旋震蕩重懸細胞。
- 加入表格 1?中相應體積的 Buffer?A，渦旋震蕩 10-20?秒裂解細胞。加入同等體積的 Buffer?B?到管中震蕩混勻。
請注意：部分未完全裂解的細胞不會影響樣品質量。
- 將裂解的細胞轉移到預冷的離心管柱套管中，14000-16000rpm?離心 30?秒-1?分鐘取出。棄去離心管柱，將接收管中溶液轉移到新的離心管中保存。蛋白提取完成可應用于下游實驗。
表格 1，不同細胞體積應加入相應體積裂解液
| 細胞體積（ul） | 緩沖液 A（ul） | 緩沖液 B（ul） |
| 5 | 20 | 20 |
| 10 | 50 | 50 |
| 20 | 100 | 100 |
| 30 | 200 | 200 |
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- 貼壁細胞
- 將緩沖液和離心管柱及接收管套管放在冰上預冷
- 貼壁細胞生長 90-100%融合，將預冷的 PBS?直接加入培養板，培養皿或培養瓶中清洗貼壁細胞，吸去上清。
- 按照表 2?中將相應體積的 Buffer?A?均勻的加入整個器皿表面，將器皿放在冰上 2?分鐘，加入等體積的 Buffer B。用吸頭將細胞刮下混勻后，將裂解的細胞轉移到預冷的離心管柱套管中，14000-16000rpm?離心 30?秒-1?分鐘取出。棄去離心管柱，蛋白提取完成可應用于下游實驗。
表格 2，不同貼壁細胞量應加入相應體積裂解液
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| 器皿 | Buffer A（ul） | Buffer B（ul） |
| 96 孔板 | 25 | 25 |
| 24 孔板 | 125 | 125 |
| 6 孔板 | 250 | 250 |
動物組織總蛋白提取
以下步驟是從 10-20mg 動物組織中提取，對于昆蟲樣品，例如果蠅，使用 15-20 個幼蟲，蛹或成蟲樣本。如果起始量較大或者較小，需調整相應裂解液的用量比例。
- 將Buffer?和離心管柱及接收管套管放在冰上預冷
- 將 10-20mg?新鮮/冷凍組織放置于離心管柱上，加入 200ul?Buffer?A?到離心管柱上，用塑料棍扭轉研磨 50-60 次，加入 200ul?Buffer?B?到離心管柱中，繼續研磨 30-60?次。注意：塑料研磨棒可以重復使用，用蒸餾水徹底沖洗干凈，用紙巾擦干。
- 蓋上蓋子，14000-16000rpm?離心 30?秒-1?分鐘取出。棄去離心管柱，將接收管中的蛋白溶液轉移到新管中保存，蛋白提取完成可應用于下游實驗。