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注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
生物體內巰基主要包括非蛋白質巰基和蛋白質巰基。巰基化合物在體內具有重要的解毒功
能，對生物體的自我調節具有非常重要的生理意義。
測定原理：
巰基基團與5,5’-二硫代-雙-**苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有最
大吸收峰。
自備實驗用品：
天平、研缽、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。
試劑組成和配制：
提取液：液體
100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體
15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體
1 mL×1 管，4℃避光保存。
樣品的制備：
1.
動物、植物組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g
組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后加入4mL甲醇，室溫震蕩10min，然后10000g，
4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2.
細胞：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞
加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）然
后10000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
3.
血清、培養液：取0.1mL，加0.4mL甲醇，室溫震蕩10min，然后10000g，4℃離心10min，取
上清置冰上待測。
操作步驟：
1、分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長至412nm，蒸餾水調零。
2、操作表
對照管
測定管
樣品（μL）
40
40
試劑一（μL）
150
150
試劑二（μL）
10
H2O（μL）
10
混勻，25℃靜置，于微量石英比色皿/96孔板，測定412nm吸光值。ΔA=A測定-A對照。
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y =1.7236 x，R2=0.9994第 2頁，共 2 頁
1.
組織：
非蛋白質巰基含量（μmol/g）=ΔA÷1.7236×V 反總÷ (V 樣÷V 樣總×W)×5
=14.5×ΔA÷W
2.
血清、培養液：
非蛋白質巰基巰基含量（μmol/mL）=ΔA÷1.7236×V 反總÷V 樣×5×103=14500×ΔA
3.
細胞：
非蛋白質巰基含量（μmol/104）=ΔA÷1.7236×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)×5
=14.5×ΔA÷細胞數量
V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣：反應中樣品體積，0.04mL；V 樣總：加入提取液體積，
1mL；W：樣品質量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；103：1mmol/L=103μmol/L
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.8618x，R2=0.9994
1.
組織：
非蛋白質巰基含量（μmol/g）=ΔA÷0.8618×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）×5
= 29×ΔA÷W
2.
血清、培養液：
非蛋白質基含量（μmol/L）=ΔA÷0.8618×V 反總÷V 樣×5×103=29000×ΔA
3.
細胞：
非蛋白質巰基含量（μmol/104）=ΔA÷0.8618×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)×5
=14.5×ΔA÷細胞數量
V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣：反應中樣品體積，0.04mL；V 樣總：加入提取液體積，
1mL；W：樣品質量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；103：1mmol/L=103μmol/ L
注意事項
最低檢出限為10μmol/L。