產品簡介：

??His標簽蛋白純化試劑盒(耐還原螯合型) (His-tag?Protein?Purification?Kit)，俗稱鎳柱試劑盒，是一種采用了新型的His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)的可以兼容還原劑和螯合劑，并能簡單、快速、高效并且高特異性地純化His標簽蛋白的試劑盒。

??試劑盒提供了His標簽蛋白所需的相關試劑和親和層析柱空柱管，為His標簽蛋白的純化帶來了極大的便利。

??通常帶有6個組氨酸標簽的重組蛋白(6X?His-tagged?recombinant?protein)或帶有6個以上連續組氨酸標簽的重組蛋白，被稱為His標簽蛋白。蛋白樣品溶液通過His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)時，重組蛋白His標簽上的組氨酸殘基能特異性地結合到His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)中的鎳離子上，其它蛋白則不能被結合。洗滌后， His標簽重組蛋白可在非變性條件下被洗脫，從而被分離純化。

??His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)對His標簽重組蛋白的親和力強、選擇性高、結合容量大，可以獲得高純度的His標簽重組蛋白，可用于簡單、快速、高效地純化細菌、哺乳動物細胞、昆蟲及桿狀病毒等多種表達系統中表達的His標簽重組蛋白。純化的蛋白可以用于結構和功能研究、抗體制備、蛋白與蛋白相互作用、蛋白與核酸相互作用等方面的研究。

??His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)采用了一種高度交聯的6%瓊脂糖凝膠(Sepharose?CL-6B)為基質，并使用了進一步優化的接臂和鎳離子螯合技術，和目前市售的大多數Ni-NTA?agarose或類似產品相比，非特異性蛋白結合顯著降低， 耐受壓力強，鎳離子螯合非常穩定。和同類產品相比，本產品由于鎳離子基本不會流失，重復使用本純化介質時不需要重新裝載鎳離子。

??Ni-NTA?agarose以及絕大多數類似的鎳柱產品不能耐受蛋白樣品中常見濃度的還原劑如二硫蘇糖醇(DTT)、β-巰基乙醇等以及常見濃度的螯合劑如EDTA等，但His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)可以很好地耐受DTT等還原劑以及EDTA等螯合劑。本產品可耐受20mM?DTT等還原劑，以及20mM?EDTA等螯合劑。這為需要添加還原劑或螯合劑的蛋白樣品的純化提供了可能性。本產品不兼容8M尿素和6M鹽酸胍。對于包涵體蛋白的純化，在采用8M尿素或6M鹽酸胍溶解蛋白的情況下，需要通過透析去除尿素和鹽酸胍后才能使用本產品進行His標簽蛋白的純化。

??His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)已經螯合了鎳離子，呈藍色，凝膠的顆粒直徑為45-165μm?？赡褪艿淖畲髩毫?/span>0.025MPa，約合5.8psi。采用固定流速進行蛋白純化時的推薦流速為0.5ml/min。

??His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)可以高容量、高特異性地結合His標簽蛋白。最大蛋白結合量為20-30mg 蛋白/毫升凝膠。實際使用時的最大結合量取決于待純化的His標簽重組蛋白的分子量大小，分子量越大則最大結合容量越大， 分子量越小則最大結合容量越小。對于分子量為50kD的蛋白，每毫升凝膠的實際最大純化量約為6-10mg，對于分子量為100kD的蛋白，每毫升凝膠的實際最大純化量約為12-20mg。但對于分子量相同的蛋白，也會因為蛋白本身特性的不同，結合的最大容量也會有所不同。

??His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)儲存在30%乙醇中，10ml總體積中5ml為凝膠，5ml為液體，需要充分重懸后再吸取。

??一個包裝的本產品足夠進行10?次His?標簽重組蛋白純化，每次細菌沉淀的濕重約為1?克。每次蛋白的最大純化量為10-15mg， 具體的最大純化量和蛋白分子量有關；對于分子量為 50kD?的帶有 His?標簽重組蛋白，每次的蛋白最大純化量為 3-10mg。在不使用親和層析柱空柱管的情況下，參考本說明書本試劑盒足夠進行 500 次的小量 His 標簽蛋白純化。

包裝清單：

保存條件：

4oC保存，至少一年有效。除His-tag Purification Resin (耐還原螯合型)外，其余均可以-20oC保存。

注意事項：

??請勿在-20oC或更低溫度冷凍保存His-tag Purification Resin?(耐還原螯合型)。

??His-tag?Purification?Resin?(耐還原螯合型)使用過程中，緩沖試劑如Tris、HEPES、MOPS等的濃度不宜超過100mM， EDTA濃度不宜超過20mM，SDS和sarkosyl的濃度不宜超過0.3%，Triton、Tween、NP-40的濃度不宜超過2%，脫氧膽酸鈉、CHAPS的濃度不宜超過1%，組氨酸濃度不宜超過