細菌基因組DNA提取試劑盒
品牌：Solarbio | 貨號：D1600
| 英文名稱 | Bacterial Genomic DNA Extraction Kit |
|---|---|
| 儲存條件 | 酶附件-20℃，其它試劑RT，復檢期1年 |
| 單位 | 盒 |
? ? ? 本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統，提取細菌基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司特有新型材料，能夠高效專一吸附DNA，可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DN**段大，純度高，質量穩定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規操作，包括酶切、 PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。
貨號：D1600?
規格：50T/ 100T?
保存：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復檢期 12 個月，2℃-8℃保存時間更長。?
產品簡介：?
本試劑盒采用可以特異性結合 DNA 的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統，提取細菌基因組 DNA。離心吸附柱 中采用的硅基質材料為本公司特有新型材料，能夠高效專一吸附 DNA，可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有 機化合物。提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質量穩定可靠。使用本試劑盒提取的基因組 DNA 可用于各種常 規操作，包括酶切、 PCR、文庫構建、Southern 雜交等實驗。 操作步驟： 使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。 所有離心步驟均為使用臺式離心機在 室溫下離心。?
操作步驟： 使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。 所有離心步驟均為使用臺式離心機在 室溫下離心。?
1、取細菌培養液 1ml，12000rpm 離心 1min.，盡量吸除上清。
?2、向菌體中加入 200ul 溶液 A，振蕩或用移液器吹打使菌體充分懸?。ㄈ绻歉锾m氏陽性菌，可在此步驟加入終 濃度為 20mg/ml 的溶菌酶），向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml)，充分顛倒混勻，室溫放置 15-30min。
?3、向管中加入 20ul 的蛋白酶 K(10mg/ml)，充分混勻，55℃消化 30-60min，消化期間可顛倒離心管混勻數次，直 至樣品消化完全為止，此時可見菌液呈清亮粘稠狀。
?4、向管中加入 200ul 溶液 B，充分顛倒混勻，如出現白色沉淀，可于 75℃放置 15-30min，沉淀即會消失，不影響 后續實驗。如果溶液未變清亮，說明樣品消化不徹底，可能會導致 DNA 的提取量以及純度降低，還可能堵塞吸 附柱。?
5、向管中加入 200ul 無水乙醇，充分混勻，此時還可能會出現絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀 沉淀都加入到吸附柱中，靜置 2min。
?6、12000rpm 離心 2min. 棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
?7、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇)。12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液， 12000rpm 離心 l min， 棄廢液，將吸附柱放入收集管中。?
9、12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除， 否則漂洗液中的乙醇會影響后續實驗如酶切、PCR 等。?
10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置 5min，12000rpm 離心 1min。?
11、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min ，12000rpm 離心 2 min，即可得到高質量的細菌基因組 DNA。
注意事項:
?1、樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。?
2、若試劑盒中的溶液出現沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。?
3、如果實驗中的離心步驟出現柱子堵塞的情況，可適當延長離心時間。?
4、洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul，體積過小會影響回收效率；洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響，若需要 用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調至此范圍)， pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。 DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。?
5、DNA 濃度及純度檢測：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關?；? 收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在 OD260 處有顯著吸收峰， OD260 值為 1.0 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/0D280 比值應為 1.7-1.9，如果洗脫時不 使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。?
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