基于 TSA 的 mIHC 技術，能使我們對有限的樣本同時檢測盡可能多的指標。但 mIHC 實驗中抗體配比、實驗條件的優化耗時費力。本文整理了 CST 已優化好的 mIHC 實驗方案。以靶點為順序，結合靶點解讀和點評，給大家介紹有哪些 CST 優化實驗方案可供參考。
——作者按
通過之前的介紹，我帶同學們了解到基于 TSA (酪胺信號放大) 技術的多重熒光免疫組化 mIHC，能夠幫我們避免體系中多個抗體共孵育帶來的干擾，大大方便實驗設計；并且能夠提供強大的信號放大效果。隨后進一步介紹了優化 mIHC 實驗的方法，以及一些能幫助更好更快完成實驗的一些標準和技巧。
是不是草船和東風都已具備，躍躍欲試的同學們早就迫不及待的擼起袖子干了起來。不少同學做的過程中就發現，其實優化出條件合適的 mIHC 的 Panel 是要花很多功夫的。那么有沒有什么簡單的方法讓小伙伴兒們能快點出 Data 呢?
當！然！有！下面我就帶大家盤點一下，任勞任怨的 CST 老（ke）黃（xue）牛（jia）們為大家耕耘好的成果——已經優化好的實驗方案（Panel）。如果你正是要用 mIHC 染這些指標，趕緊藏好偷著做吧，別讓隔壁組搶發了 Paper !
分別介紹以下已經優化過 mIHC Panel 的靶標：
· Cytokeratin - 細胞角蛋白：上皮細胞源腫瘤標志物
· CD8α– CD8 抗原的活性亞基：效應 T 細胞標志物
· PD-L1：免疫檢查點明星配體
· PD-1：免疫檢查點明星受體
· B7-H4：免疫檢查點配體
· B7-H3：免疫檢查點配體
· TIM-3：免疫檢查點受體
· LAG3：免疫檢查點受體
· CD68：單核細胞/巨噬細胞標志物
· FoxP3： Treg(調節性 T) 細胞標志物
· Arginase-1：MDSC 通過影響環境代謝物參與免疫抑制的關鍵酶
· HER2：乳腺癌標志物
· 腫瘤標志物：ALK、AR、EGFR、Her-3、Met、PSA、PSMA、ROS1
· T 細胞標志物：CD3e
· 免疫檢查點配體：PD-L2
· 免疫檢查點受體及配體：VISTA
Cytokeratin - 細胞角蛋白：上皮細胞源腫瘤標志物
細胞角蛋白是主要在上皮細胞表達的中間絲蛋白（一種細胞骨架）。角蛋白表達的組織和分化特異性很高，因此被廣泛作為生物標志物 [7]，在研究和病理診斷中用以標識上皮細胞，及惡性上皮腫瘤（Carcinoma）。
CD8α– CD8 抗原的活性亞基：效應 T 細胞標志物
CD8 抗原是細胞表面糖蛋白，在大多數細胞毒性 T 淋巴細胞（CTL）上表達。在 T 細胞上，CD8 是 TCR（T 細胞受體）的共同受體，能和 TCR 一起識別 MHC（主要組織相容性復合體）?；钚缘?CD8 可以是由兩個 α 組成的同二聚體，也可以是由 α 和 β 亞基組成的異二聚體。CD8α 的免疫球蛋白樣結構域與 MHC I 類分子的 α3 結構域相互作用， CD8 確保 TCR -抗原相互作用的特異性，延長 T 細胞與抗原呈遞細胞之間的接觸，并且 α 鏈能募集 T 細胞活化所必需的酪氨酸激酶 Lck (#2984) [8]。
PD-L1：免疫檢查點明星配體
PD-L1，即程序性細胞死亡-配體 1，又稱 B7-H1 或 CD274，是調節 T 細胞活化和免疫應答的 B7 細胞表面配體家族的成員。PD-L1 能結合 T 細胞上的 PD-1 跨膜受體并抑制其活化。PD-L1 的表達主要在抗原呈遞細胞、活化 T 細胞，以及胎盤、心臟和肺等組織中 [9-11]。另外，PD-L1 在黑色素瘤，卵巢癌，結腸癌，肺癌，乳腺癌和腎細胞癌也有表達 [11-13]，這些腫瘤細胞中 PD-L1 上調能幫助其逃避免疫監視 [14]。
PD-1：免疫檢查點明星受體
PD-1，即程序性細胞死亡 1 蛋白，又稱 PDCD1 或 CD279，是調節 T 細胞活化和免疫應答的免疫受體 CD28 家族的成員 [15, 16]。PD-1 在活化 T 細胞中表達，能被其配體 PD-L1 和 PD-L2 激活 [10]，進而抑制 TCR 信號傳導 [17]。除 T 細胞外，活化 B 細胞和單核細胞中也會表達 PD-1 [18]。PD-1 途徑在免疫耐受中起重要作用 [16]，癌細胞也會利用此途徑逃避免疫監視 [14]。
B7-H4：免疫檢查點配體
B7-H4，又稱 VTCN1，是調節 T 細胞活化和免疫應答的細胞表面配體 B7 家族的成員。B7-H4 蛋白在抗原呈遞細胞和 B 細胞表達特異性表達，能抑制 T 細胞活化、增殖和細胞因子產生 [19-21]。在幾類腫瘤中也發現 B7-H4 蛋白，包括卵巢癌和乳腺癌 [22]。阻斷 B7-H4 功能可幫助恢復癌癥患者 T 細胞功能，具有潛在的治療價值 [23]。
B7-H3：免疫檢查點配體
B7-H3，又稱 CD276，是調節 T 細胞活化和免疫應答的 B7 家族細胞表面配體的成員。B7-H3 是 T 細胞應答的負調節物，能抑制 T 細胞增殖 [24]。B7-H3 主要由抗原呈遞細胞，活化的 T 細胞和一些正常組織，包括胎盤和前列腺表達 [25]。在腫瘤中，包括前列腺癌，乳腺癌，結腸癌，肺癌和胃癌以及來自腫瘤相關脈管系統的內皮細胞中可見 B7-H3 的表達 [26, 27]。
