補料分批細胞培養(yǎng)需要進行澄清步驟，以收獲產(chǎn)物，而不改變產(chǎn)物質(zhì)量。在進行進一步的下游工藝及上樣至昂貴的捕獲層析柱之前，盡可能去除細胞碎片和固體物質(zhì)非常重要，以提高層析柱的壽命及產(chǎn)物純度。離心和深層過濾是當前標準的澄清技術，但其通常需要進行開放式操作，且設備占地較大。此外，此類多階段工藝往往費時費力，難以規(guī)模放大，且可能影響蛋白質(zhì)收率。‘
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這里，我們介紹一種可放大的單步澄清方法，高產(chǎn)量收獲（HPH），其是在補料分批培養(yǎng)中使用XCell ATF系統(tǒng)的新方法。與離心和深層過濾不同的是，HPH可實現(xiàn)整合式的澄清操作，同時維持細胞活性，并使蛋白質(zhì)降解最小化。相比傳統(tǒng)工藝，HPH已被證實可顯著提高蛋白質(zhì)生產(chǎn)。
在本案例研究中，在補料分批培養(yǎng)結束前4天，使用XCellTM ATF系統(tǒng)，以0.25、0.5和1.0 VVD的速度進行HPH。在此期間，灌流方法通過更新營養(yǎng)底物，去除毒性副產(chǎn)物，而可提高活細胞密度（VCD），并維持細胞活性＞90%。在培養(yǎng)的最后一天，使用相同的XCellTM ATF系統(tǒng)從生物反應器收獲剩余的蛋白質(zhì)。結果顯示，蛋白質(zhì)產(chǎn)量可翻倍，細胞懸液被澄清，而不增加原補料分批的工藝時間。整個工藝在整合式、封閉且無生物負載的環(huán)境中以單步形式進行，獲得可直接用于下游純化的澄清產(chǎn)物。
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