貨號：D0010
規格：100T
保存：低溫運輸，冰袋運輸。-20℃保存 12 個月。長期保存推薦 -80℃。
產品內容：
| 組分編號? ? | 名稱 | 100 次 | 1000 次 |
| A | 細胞裂解液 | 60 mL | 60 mL*10 |
| B | 螢火蟲熒光素酶緩沖液? | 10 mL | 10 mL*10 |
| C | 螢火蟲熒光素酶底物（50 X） | 200 μL | 200 μL*10 |
| D | 海腎熒光素酶緩沖液? | 10 mL | 10 mL*10 |
| E | 海腎熒光素酶底物（50 X）? | 200 μL | 200 μL*10 |
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注意：螢火蟲熒光素酶反應工作液和海腎熒光素酶反應工作液現配現用。
產品說明：
螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）大小為61 KDa，單亞基蛋白，能夠催化熒光素（luciferin）氧化， 生成氧化熒光素oxyluciferin；海腎熒光素酶（Renilla luciferase）為36 KDa的單亞基蛋白，能夠催化腔 腸素（coelenterazine）氧化形成coelenteramide。二者在翻譯后均無需修飾即可發揮作用。
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒首先以熒光素為底物來檢 測螢火蟲熒光素酶報告基因的活性，之后在淬滅該熒光反應的同時，以腔腸素為底物檢測海腎熒光素酶報 告基因的活性。其檢測機理
機理如圖所示：
螢火蟲螢光素酶催化luciferin發光的最強發光波長為560 nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發光 的最強發光波長為465 nm。
通常將目的基因的5′UTR或者啟動子克隆至Firefly Luciferase的上游，或者3′UTR克隆至Firefly Luciferase的下游，通過檢測螢火蟲熒光素酶的量來檢測啟動子或者調控元件的轉錄調控作用。Renilla Luciferase作為內參，來消除細胞數量或者轉染效率的差異。
實驗步驟
1：裂解細胞
1）將細胞裂解液充分混勻，按如下方式加入細胞裂解液，充分裂解細胞。
a: 對于貼壁細胞，吸盡細胞培養液，按照下表比例加入細胞裂解液，輕輕旋轉培養皿或者培養板使裂 解液完全覆蓋細胞；
b: 對于懸浮細胞，離心棄去上清，按照下表比例加入裂解液，
| 細胞培養板? | 96 孔板? | 48 孔板? | 24 孔板? | 12 孔板? | 6 孔板 |
| 裂解液加入量?? | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 300 μL? | 500 μL |
2）冰上孵育 5 min，充分裂解細胞。
3）（選作）10000-16000rpm 離心 1 min，取上清。
2：熒光檢測
1）取20 μL 細胞裂解液，加至黑色酶標板中。按照實驗需要，可設置 3 孔-5 孔重復。
2）配制螢火蟲熒光素酶反應工作液和海腎熒光素酶反應液，即螢火蟲熒光素酶底物（50 X）和海腎 熒光素酶底物（50 X） 分別用對應的緩沖液稀釋至 1 X 工作液。并孵育至室溫。
3）加入 100 μL 螢火蟲熒光素酶反應液，震板混勻，檢測螢火蟲熒光素酶的活力，檢測盡量在 30 min 內 完成。
4）加入 100 μL 海腎熒光素酶反應液，震板混勻，檢測海腎熒光素酶的活力，檢測盡量在 30 min 內完 成。
5）分析數據。?
注意事項
1）檢測過程中需自備耗材和設備包括如下：PBS；100 μL 移液器或者排槍；黑色酶標板； Luminometer 發光計或者多功能酶標儀或者其他能夠檢測生物發光的儀器。
2）關于檢測儀器的選擇：能夠檢測化學發光或者生物發光的儀器都可適用于此試劑盒。如果使用多 功能酶標儀，為防止各孔之間的干擾，我們推薦使用黑色酶標板，并且不同實驗組之間最好有間隔。
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