3．?按照細胞數量計算

酶活性定義：每10⁴個細胞每分鐘氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位（U）

漆酶活性（U/10⁴?cell）=△A÷(ε×d)?×V 反總÷(V 樣×細胞數量÷V樣總)÷T= 65×△A÷細胞數量

4．?按照液體體積計算

酶活性定義：每10⁴個細胞每分鐘氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位（U）

漆酶活性（U/L）=△A÷(ε×d)?×V 反總÷V 樣÷T= 65000×△A

ε：ABTS 毫摩爾消光系數；36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，0.7mL；V樣：反應中樣本體積，0.1mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質量，g；T:反應時間，3min

注意事項：

1.?工作液需臨用前配制，并且盡快使用，4℃保存一周，若變色則不能使用。

2.?測定之前進行預實驗，若吸光值較高，請將樣品用提取液?行適當的稀釋再測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數。

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產品名稱: 漆酶活性檢測試劑盒

產品英文名: Laccase Assay Kit

產品貨號：BC1630 ???????

產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷85A三樓

產品商標：solarbio

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簡要介紹：

漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環境污染物降解和木質纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應用。
????漆酶分解產物ABTS 產生ABTS自由基，在420nm 處的吸光系數遠大于底物ABTS，測定ABTS 自由基的增長速率，可計算得漆酶的活性。

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產品詳細描述

產品內容：

提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體30mL×1 瓶，4℃保存。

工作液：粉劑×2 瓶，4℃避光保存，臨用前加15mL 試劑一溶解。

產品說明：

漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高

等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環境污染物降解和木質纖維素降解

以及生物檢測方面有非常廣泛的應用。

漆酶分解產物ABTS 產生ABTS自由基，在420nm 處的吸光系數遠大于底物ABTS，測定

ABTS 自由基的增長速率，可計算得漆酶的活性。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

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操作步驟：

一、?酶液提取

1、?細胞：按照細胞數量（10⁴個）：提取液體積（ml）為500-1000:1 的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率30％或300W，超聲3s，間隔7s，總時間3min），12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、?組織：按照組織質量（g）：提取液體積（ml）為1:5-10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、?培養液：直接待檢。

二、?測定操作表