? ? ? 納米抗體（nanobodies，Nbs）是由比利時科學家Hamers等人在駱駝血液內首次發現的一種新型抗體，與傳統抗體相比，這種抗體不存在輕鏈，只有重鏈抗體（HcAb）和兩個常規的CH2和CH3區組成，分子量只有15 KDa左右，被稱為納米抗體。HcAb 的特異性僅依賴于稱為 VHH 的重可變域。VHH 的重組產物被稱為單域抗體 (sdAb) 或納米抗體的片段^[1]。

一、納米抗體相對傳統抗體的優勢：

（1）和靶點結合特異性更強；

（2）更高的組織穿透力；

（3）更高的穩定性如耐高溫；

（4）適合工業化大規模生產；

（5）更容易改造和優化；

（6）更容易人源化；

二、納米抗體的制備方法

? ? ? 傳統單克隆抗體通常用雜交瘤的方法進行制備，而納米抗體則多通過噬菌體展示技術進行制備。

? ? ? 噬菌體展示技術（即：納米抗體技術）是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入M13噬菌體的P3蛋白基因序列的適當位置，以達到外源基因隨噬菌體外殼蛋白的表達而在噬菌體表面進行展示的目的。噬菌體展示的優勢在于其展示納米抗體文庫中變異抗體基因的多樣性，各個重組噬菌體（常用噬菌體為M13噬菌體）表面展示出不同的抗原結合域，相較于傳統雜交瘤方法，噬菌體展示技術在抗體基因展示與篩選層面則具有非常突出的效率優勢（如雜交瘤融合效率一般<0.4%，即1000次融合細胞中，大概4個融合子；而噬菌體展示輕松可以獲得10⁸-10⁹個正確抗體序列）。

三、納米抗體的制備流程

? ? ? 納米抗體的制備流程主要分為羊駝免疫，噬菌體文庫構建，篩選抗體庫、抗體表達與功能驗證四個步驟^[2]。

? ? ? 為了建立免疫庫，首先必須給年輕的、健康的美洲駝、單峰駱駝、羊駝等進行免疫。通常，在2個月的時間跨度內，動物被注射4-8次目標抗原和佐劑的混合物。一般每次注射約50-200μg免疫原；確切數量顯然取決于抗原分子量，更取決于其免疫原性和/或毒性。

? ? ?免疫原類型：使用可溶性、正確折疊的重組蛋白是首選推薦，也有直接DNA免疫。通常混合多達10種蛋白質來免疫動物，但更復雜的混合物也有被使用（例如：病毒、細菌、寄生蟲、完整的小鼠脾細胞或癌細胞的蛋白質提取物）^[3]。

? ? ?為了增加特定表位成功獲得納米抗體的可能性，建議對一個以上的動物進行免疫。它們是近系繁殖的動物，每一個動物都會產生獨特的免疫反應，獲得更大的納米抗體 panel，從中選擇表現最好的納米抗體。

? ? ?一些研究顯示，與美洲駝和羊駝相比，駱駝或單峰駱駝中HCAb抗體比經典抗體的比例更高。免疫接種后，取50-100毫升抗凝血（通常來自頸靜脈，盡管淋巴結活檢也是一種很好的原料），制備淋巴細胞和提取mRNA。將mRNA轉化為cDNA，用于擴增VHH基因（兩步巢式PCR）。

? ? ?一些分子，如RNA或DNA，沒有免疫原性，不能刺激產生HCAb，或者有些化合物毒性太大、傳染性太強或對動物或環境有害，在這種情況下，可以設想構建一個天然納米抗體庫或一個合成的納米抗體庫。

? ? ? ?為了能夠篩選到高親和力的納米抗體，天然抗體庫的大小一般達到10⁹-10¹⁰，其中80%左右應該編碼納米抗體。為了構建這樣一個大而多樣的天然納米抗體庫，需要從多個動物收集血液(至少10只動物，以避免由于過敏或以前感染導致的HCAbs產生偏差)。預計每mL血液有10⁶個淋巴細胞，而只有一小部分是B細胞，并且約50%可能表達HCAb，所以需要10L血液來構建10¹⁰個不同VHH克隆的納米抗體庫。

? ? ?卡梅德生物（KMD Bioscience）(https://www.kmdbioscience.cn/)建立了一個完善的、成熟的噬菌體抗體展示技術平臺。基于噬菌體展示技術平臺，卡梅德生物可以提供包括抗原設計、羊駝免疫、文庫構建與篩選、活性功能驗證等主要實驗環節，并為全球的科學家提供高特異性和高親和力的羊駝VHH抗體。此外，卡梅德生物擁有豐富的抗體工程構造經驗，能夠進行立體化的抗體上下游服務，包括抗體人源化服務、人源scFV抗體庫構建服務、人源Fab抗體文庫構建服務、人源抗體噬菌體文庫制備服務以及磷酸化抗體定制服務、抗體親和力成熟服務等，滿足不同客戶的科研要求。

這篇文章可供科研愛好者參考。它不能代替需要更詳細和專業信息的專業知識或實踐實驗程序。如果有任何內容侵權，請聯系作者立即刪除有爭議的材料。

參考文獻：

[1]?Muyldermans S. Nanobodies: natural single-domain antibodies. Annu Rev Biochem. 2013;82:775-97.

[2]?De Genst E, Saerens D, Muyldermans S, Conrath K. Antibody repertoire development in camelids. Dev Comp Immunol. 2006;30(1-2):187-98.

[3]?Rossotti MA, Trempe F, van Faassen H, Hussack G, Arbabi-Ghahroudi M. Isolation and Characterization of Single-Domain Antibodies from Immune Phage Display Libraries. Methods Mol Biol. 2023;2702:107-147.