?索萊寶?動物組織/細胞基因組 DNA?提取試劑盒
貨號：D1700
規格：50T/ 100T
?保存：室溫(15℃-25℃)?干燥保存，復檢期 12?個月，2℃-8℃保存時間更長。
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試劑盒內容： |
D1700-50T |
D1700-100T |
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RNase A |
1ml |
1ml×2 |
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蛋白酶 K |
1ml |
1ml×2 |
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溶液 A |
10ml |
20ml |
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溶液 B |
10ml |
20ml |
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漂洗液 |
15ml |
15ml×2 |
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洗脫液 |
10ml |
20ml |
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吸附柱 |
50 個 |
100 個 |
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收集管 |
50 個 |
100 個 |
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說明書 |
1 份 |
1 份 |
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產品簡介:
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本試劑盒采用可以特異性結合 DNA?的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統，提取組織和細胞的基因組 DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司特有新型材料，能夠高效、專一吸附 DNA，可最大限度去除雜質蛋白 及細胞中其他有機化合物。 提取的基因組 DNA?片段大，純度高，質量穩定可靠。使用本試劑盒提取的基因組 DNA 可用于各種常規操作，包括酶切、?PCR、文庫構建、Southern 雜交等實驗。
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操作步驟：
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使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入休積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機 在室溫下離心。
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1、樣品的處理：
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a、細胞：取?1×106-1×107個懸浮培養細胞，12000rpm離心?1min收集細胞，貼壁細胞先用胰蛋白酶消化處?理，再用預冷的PBS吹打成細胞懸液，然后 12000rpm離心 1min收集細胞，盡量除去上清，加 200ul溶液A，振 蕩至徹底混勻。
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b、 組織：組織量不宜過大，一般不要超過?25mg，可以使用勻漿器勻漿，最好用液氮研磨成粉末狀，再用?預冷的 PBS?或無菌水充分懸浮，然后 12000rpm?離心 1min?收集細胞，盡量除去上清，加 200ul?溶液 A，振蕩至 徹底混勻。
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2、向懸浮液中加入?20ul (10mg/ml) 的?RNase A，55℃放置?15min。
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3、加入?20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶?K，充分顛倒混勻，55℃水浴消化，細胞消化時間較短，組織消化時間較長，?一般需要 1-3?個小時才能完成（鼠尾需要消化過夜）。消化期間可顛倒離心管混勻數次，直至樣品消化完全為止。 消化完全的指標是：液體清亮及粘稠。
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4、加入?200ul 體積溶液?B，充分顛倒混勻，如出現白色沉淀，可放置于?75℃?15-30min，沉淀即會消失，不影
響后續實驗。如溶液未變清亮，說明樣品消化不徹底，可能導致提取的 DNA?量少及不純，還有可能導致堵塞 吸附柱。
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5、加入?200ul 無水乙醇，充分混勻，此時可能會出現絮狀沉淀，不影響?DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都?加入吸附柱中。
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6、12000rpm 離心?1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
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7、向吸附柱中加入?700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，?12000rpm 離心?1min，棄廢液，將吸?附柱放入收集管中。
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8、向吸附柱中加入?500ul 漂洗液，12000rpm 離心?1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
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9、12000rpm 離心?2min，將吸附柱敞口置于室溫或?50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，?否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR?等。 10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加?50-200ul 經?65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置
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5min，12000rpm 離心?2min。
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11、可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中，12000rpm 離心?2min，即可得到高質量的基因組?DNA。
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注意事項:
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1、試劑盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。?2、樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA片段較小且提取量也下降。?3、如果試劑盒中的溶液出現沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果。?4、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul，體積過小會影響回收效率:洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要?用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍)，pH?值低于7.0會降低洗脫效率。
