常見問題：
- 如何選擇合適的一抗？
- 如何選擇合適的二抗？
- 如何選擇合適的同型對(duì)照？
- 如何選擇陽性對(duì)照？
- 如何確定一抗的稀釋比例？
- 如何選擇合適的抗原修復(fù)方式？
- 為何WB檢測條帶大小與預(yù)期有差別？
- 抗體能夠用于其他種屬/實(shí)驗(yàn)方法？
- 如何確定抗體是否能用于未經(jīng)驗(yàn)證的種屬？
- 抗體能否與該蛋白的其它亞型或同一家族其他蛋白交叉反應(yīng)?
- 如何保存抗體？
- 如何分裝抗體？
- 能否提供抗體的免疫原序列？
1、如何選擇合適的一抗？
請(qǐng)先確定您要檢測的種屬和使用的實(shí)驗(yàn)方法，然后查找相關(guān)產(chǎn)品，根據(jù)說明書上描述的“適用種屬和實(shí)驗(yàn)方法”來確定合適的抗體。如果說明書中有明確您要檢測的種屬和實(shí)驗(yàn)方法均經(jīng)過檢測，則您可以放心地購買該產(chǎn)品。如果說明書中沒有注明您用的種屬和實(shí)驗(yàn)方法經(jīng)過驗(yàn)證，那么請(qǐng)參考第8、9、10條。
Abcam網(wǎng)站所有說明書都是根據(jù)驗(yàn)證情況（Abcam實(shí)驗(yàn)室以及客戶）實(shí)時(shí)更新的，所以可以放心參考！
2、如何選擇合適的二抗?
二抗的選擇原則：
- 針對(duì)一抗來源的二抗（比如一抗是小鼠來源的，二抗就要是抗小鼠的）
- 針對(duì)一抗Ig亞型的（比如一抗是IgM，二抗就要是抗IgM的抗體）
- 為了增加特異性、降低背景：可以選擇Fab段的抗體（去除Fc段的）、經(jīng)過標(biāo)本來源種屬血清吸附的的二抗
- 查看二抗的說明書，選擇經(jīng)過驗(yàn)證可以用于相應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法的二抗
Abcam提供各種種屬、各種類型和標(biāo)記的二抗，完全滿足您實(shí)驗(yàn)的需要：
- 可以通過一抗說明書頁面的“Related Products”來選擇合適的二抗
- 通過產(chǎn)品分類目錄選擇合適的二抗
3、 如何選擇同型對(duì)照？
同型對(duì)照的主要目的是確定一抗的結(jié)合是特異性的，而不是非特異性的Fc受體或與其他蛋白的相互作用。同型對(duì)照要與一抗的來源、Ig分型和標(biāo)記完全一致。例如：一抗是FITC標(biāo)記，其抗體分型是小鼠的IgG1，則同型對(duì)照要選擇是FITC標(biāo)記的小鼠的IgG1。
Abcam提供各種種屬和Ig分型的同型對(duì)照產(chǎn)品，可以在Abcam和51AB的網(wǎng)站，產(chǎn)品分類“Isotype”/“同型對(duì)照”中查找和選擇合適的產(chǎn)品
多抗的同型對(duì)照：
絕大部分的同型對(duì)照產(chǎn)品都是單克隆抗體，因此不適用于作為多克隆抗體的對(duì)照（因?yàn)槎嗫购卸喾NIgG的亞型）。Abcam同樣提供了幾種多抗的同型對(duì)照產(chǎn)品，滿足實(shí)驗(yàn)者的需要。
4、如何選擇陽性對(duì)照?
陽性對(duì)照的使用是一個(gè)實(shí)驗(yàn)中確定抗體及檢測系統(tǒng)是否正常工作的依據(jù)，也是確定待測標(biāo)本中是否存在待測蛋白的一個(gè)依據(jù)！尤其是檢測的標(biāo)本是不確定是否有待測蛋白表達(dá)時(shí)。因此當(dāng)實(shí)驗(yàn)沒有陽性結(jié)果出現(xiàn)時(shí)，最好的選擇是實(shí)驗(yàn)合適的陽性對(duì)照。
大部分Abcam的說明書上都有推薦的陽性對(duì)照。但是如果說明書上沒有推薦時(shí)，請(qǐng)參考以下條款：
- 看看說明書中是否有Abreviews。任何被其他客戶成功檢測的組織、細(xì)胞或者裂解物均可以作為合適的陽性對(duì)照！
- 根據(jù)說明書上的Swiss-Prot 或 Omnigene 數(shù)據(jù)庫來查找。這些數(shù)據(jù)庫經(jīng)常會(huì)列出該蛋白表達(dá)的組織，這也可以作為合適的陽性對(duì)照！
- 查查該蛋白的GeneCards 吧，這里通常會(huì)有蛋白在不同組織的表達(dá)水平。
- 如果上述方法還是不能找到合適的陽性對(duì)照，推薦您去PubMed 查查發(fā)表文章，看看有無文章報(bào)道該蛋白表達(dá)的細(xì)胞和組織
5、如何確定一抗的稀釋比例?
如果說明書中有推薦的稀釋比例，請(qǐng)按照該稀釋比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。但是由于標(biāo)本類型、實(shí)驗(yàn)條件、操作環(huán)境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。實(shí)驗(yàn)者需要在推薦濃度周圍進(jìn)行多個(gè)濃度梯度的實(shí)驗(yàn)，從中發(fā)現(xiàn)最佳的稀釋比例。