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聚凝胺(10mg/ml) DNA轉染增強劑
品牌：Solarbio | 貨號：H8761
- 別名?: DNA轉染增強劑
- 英文名稱?: Polybrene (10mg/ml)
- 儲存條件?: -20oC可保存2年
- 單位?: 支
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| 商品貨號： | 商品品牌： | 規格 | 基本售價： | 選擇規格 |
|---|---|---|---|---|
| H8761-500ul | Solarbio | 500ul | 240.00元 | ? |
| H8761-500ul*5 | Solarbio | 500ul*5 | 700.00元 |
產品介紹
Polybrene（聚凝胺，hexadimethrine bromide）是一種多聚陽離子聚合物，
常用于哺乳動物細胞的DNA轉染實驗以增強脂質體的轉染效率。
Polybrene目前廣泛用于逆轉錄病毒介導的基因轉染，慢病毒介導的基因轉染，
作用機理可能是通過中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進吸附作用。
Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑），
常用來生產非特異性凝集的紅細胞。另外Polybrene也多用于蛋白測序，
因為小劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現象。
PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。
? ? ? 本產品為即用型溶液，粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液，
并用0.22μM濾膜過濾除菌。使用時一般按1:1000-1：2000稀釋，
依細胞種類不同稀釋比例不同，具體查閱相關文獻。
? ? ??注：Polybrene對某些細胞（如末端分化的神經元，DC細胞）毒性較大，
初次應用建議先做毒性測試。
操作步驟(僅供參考，具體使用濃度請參考相關文獻)
實驗 1：逆轉錄病毒感染（Retroviral Infection）
1. 重組逆轉錄病毒原液的制備：
取 5ml 生長培養基（5%血清）加入約含單層轉染逆轉錄包裝細胞的 100mm 培養盤內。
孵育 24h 后，吸去培養液并用 0.45μm 濾器過濾。
2. 待感染細胞的培養：
100mm 培養盤內加入 10ml 完全培養基，
細胞密度為 5×105/盤。
3. 病毒感染：細胞培養 24h 后，吸去完全培養液。
用含 polybrene 的 2ml 病毒上清 （或將病毒原液稀釋到 2ml）感染細胞，polybrene 的終濃度為 5μg-10μg/ml。37°C 孵育 3-6h。
4. 收集病毒顆粒：加入 8ml 完全培養基。
感染 3 天后，按照 1:5 的比例用選擇培養基裂解細胞。
實驗 2：轉染
1. 完全生長培養基培養細胞，培養細胞密度約 50%；
2. 孵育細胞 18-24h 后準備 DNA-培養基- Polybrene 混合液，按如下操作制備混合液：
①添加完全培養基（60mm 培養皿 2ml，100mm 培養皿 3ml），37°C 預熱；
②添加 10ng~10μg 質粒輕輕混勻；
③加入 Polybrene 至終濃度為 5μg-10μg/ml。
輕輕混勻。以上每個成分需要按順序加入。
3. 去除培養基，在細胞中加入 DNA-培養基-Polybrene 溶液，在 37°C 孵育細胞 6-20h。
細胞培養的前 6h 內約每 1.5h 輕柔混勻。
4. 去除 DNA-培養基-Polybrene 溶液。
用 DMSO shock solution（15%DMSO in 1X HBSS）輕輕蓋住細胞（60mm 培養皿 3ml，100mm 培養皿 4ml）。
每次加入溶液時用手輕晃培養盤 10s，使得液體均勻分布。然后 37°C 孵育細胞 4min。
5. 立即去除 DMSO shock solution，用完全生長培養基輕輕清洗細胞 2 次。
對于 60mm 培養皿每次用 5ml 培養液清洗，100mm 培養皿每次用 10ml 培養液清洗。
6. 加入完全培養基到細胞中；
7. 穩定轉化：去除生長培養基，按照 1:5 的比例用選擇培養基裂解細胞。
瞬時表達：去除生長培養基，加入新鮮的生長培養基。24-72h 后收獲細胞。
注意事項為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作