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???????????????????????通用型DNA純化回收試劑盒說明書
Universal?DNA?Purification?Kit
目錄號：??YJ0519
保???存：??室溫
組分說明
?????????????????????????????????????????Cat.No.???????????????????YJ0519
??????????????????????????????????????????KitSize?????????????????????50
?????????????????????????????????????????BufferPC???????????????????50ml
?????????????????????????????????????????BufferPS???????????????????15ml
????????????????????????????????BufferPW（concentrate）????????????????10ml
?????????????????????????????????????????BufferEB???????????????????10ml
?????????????????????????????????????SpinColumnDM???????????????????50
????????????????????????????????CollectionTube（2ml）?????????????????50
產品簡介
???本試劑盒采用新型硅基質膜及特殊的緩沖液系統，高效專一的結合?DNA，既能從瓊脂糖凝膠中回收?DNA?片段，又能直接純化?PCR??產物與酶反應物中的單鏈、雙鏈?DNA，可最大限度地去除引物、酶、礦物油、瓊脂糖等雜質，獲得高純度的DNA，滿足多種實驗要求。本試劑盒可回收?50bp-50kb?的?DNA?片段，每個吸附柱最高可吸附?20?μg?的?DNA，且?DNA回收效率高達?90%。由本試劑盒回收純化的?DNA?可直接用于酶切、連接、PCR?擴增、DNA?測序等各種分子生物學實驗。
注意事項
1.??第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。
2.??使用前請檢查BufferPC是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。
3.??電泳時最好使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
4.??切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷。
5.??回收率與初始?DNA?量和洗脫體積有關。
6.??所有離心步驟均在室溫下進行。
自備試劑：無水乙醇，離心管??
操作步驟
1．?樣品處理
???A?從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段
???a1.?將單一目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余凝膠部分），放入干凈的離心管（自備）中，稱取凝膠重量。?
????????注意：若膠塊的體積過大，可將膠塊切成碎塊。
???a2.?向膠塊中加入3倍凝膠體積的Buffer?PC；當瓊脂糖凝膠濃度>2%時，建議使用6倍凝膠體積的??Buffer?PC（如凝膠重為100mg，其體積可視為100μl，依此類推）。
???a3.50℃孵育10分鐘，其間不斷溫和地上下顛倒離心管，以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊，可再補加一些溶膠液或繼續放置幾分鐘，直至膠塊完全溶解。
???????注意：1）在膠充分溶解后檢測pH值，若pH值大于7.5，可向含有DNA的膠溶液中加10-30μl?的3M醋酸鈉（pH5.0）將pH值調到5-7
?????????????2）吸附柱的容積是?700μl，若樣品體積大于?700μl?可分批加入。
?????????????3）膠塊完全溶解后最好將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在較高溫度時結合?DNA?的能力較弱。
???a4.（可選步驟）當回收片段<500bp或>4kb時，應加入1倍膠體積的異丙醇，上下顛倒混勻（如凝膠為100mg，則加入100μl異丙醇）。
???????注意：當回收片段為500bp-4kb時，加入異丙醇不會影響回收率。
???B?從PCR反應液或酶反應液中回收DNA
???b1．計算PCR反應液或酶切反應液的體積，向其中加入5倍PCR反應液或酶反應液體積的?Buffer?PC，充分混勻（無需去除石蠟油或礦物油）。
????例如：100?μl的PCR樣本中加入500μlBufferPC（不包括石蠟油或礦物油）。
2．?柱平衡:?將吸附柱（SpinColumnDM）放入收集管（CollectionTube）中，向吸附柱中加入200?μl?Buffer?PS，12,000?rpm（~13,400×g）離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
3．?將從a3或b1中所得溶液加入到平衡好的吸附柱（已裝入收集管）中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
????注意：吸附柱容積為700μl，若樣品體積大于700μl?可分批加入。
4．?向吸附柱中加入650?μl?Buffer?PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。
????注意：如果純化的DNA用于鹽敏感的實驗（例如平末端連接或直接測序），建議加入BufferPW靜置2-5分鐘再離心。
5．?將吸附柱放回收集管中，12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以徹底晾干。
?????注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、PCR等）。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。
6.??將吸附柱放到一個新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置加入30-50?μl?Buffer?EB（pH8.5）或水（pH7.0-8.5），室溫放置2分鐘。12,000rpm離心2分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
????注意：1）洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調到此范圍）。
??????????2）為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重復步驟6。
??????????3）洗脫體積不應小于30μl，體積過少會影響回收效率。
??????????4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續的酶促反應。
??????????5）回收大于10kb的DNA片段時，BufferEB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。
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