達麥迪生物秋爽價震撼來襲！
活動時間：8月15日-9月24日
T4 DNA連接酶（快速）
產品描述
T4 DNA連接酶催化雙螺旋DNA或RNA的5′磷酸末端基團和3′羥基末端基團之間形成磷酸二酯鍵。該酶能夠有效的連接平末端和黏性末端，同時修復雙螺旋DNA、RNA或DNA/RNA雜交鏈中的單鏈缺口。
蛋白來源
攜帶克隆的T4 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。
組成成分：
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25°C
隨酶提供：
B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)
B6030 (10X T4 DNA Ligase Buffer)
2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C
10X T4 DNA Ligase Buffer (B6030):
500mM Tris-HCI
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP
pH 7.6 @ 25°C
單位定義
1 unit 被定義為23°C下、30分鐘內，在50 μl 1X T4 DNA連接酶緩沖液中能夠連接50%的具有粘性末端的100 ng DN**段的DNA連接酶量。
產品信息
T4 DNA Ligase (Rapid)
Part Number L6030-HC-F
Concentration 600,000 U/ml
Unit Size 26,000 U
SDS Available on request
產品特性
Storage Temperature -25 to -15°C
Test Specification
Purity (SDS-PAGE) >99%
Specific Activity 300,000 U/mg
SS Exonuclease 6,000 U <1.0% released
DS Exonuclease 6,000 U <1.0% released
DS Endonuclease 6,000 U = no conversion
E.coli DNA Contamination 6,000 U <10 copies
產品要點：
T4 DNA連接酶是ATP依賴的酶。建議舍棄在-20°C儲存一年的反應緩沖液，用新鮮的緩沖液代替以確保最大性能。當把一個嵌入物當做目標靶物：矢量比在2到6之間時，單個嵌入的連接反應是最佳的。6:1以上的比率將會促進多重片段的嵌入，當下降到2:1比率時，將會降低連接效率。
對于有疑問的連接反應或如果DNA濃度是未知的，那就有必要將比率多樣化并進行多重連接反應。
高濃度的PEG將會顯著的降低電能細胞的轉化效率。為了將電能細胞轉化效率最大化，下面給出寫推薦的方法：
最好的：在接下來的連接反應中，利用DNA凈化吸附柱來凈化產物，并用50uL的TE洗提。DNA即準備轉化。DNA最終被轉化的量應該在0.1-10 ng的范圍之間。
較好的：在ddH20 或TE中稀釋連接產物將會降低PEG濃度。DNA最終被轉化的量應該在0.1-10 ng的范圍之間。
高濃度的T4 DNA連接酶與2X快速連接緩沖液相結合能夠顯著提高平末端連接的速度和效率，因此不建議有較長的潛伏期（>10分鐘），因為長的潛伏期能夠顯著的降低連接產物的轉化效率。為了將正確嵌入或矢量結合的轉化效率最大化，建議使用下面的方案。
酶的10X T4 DNA連接酶緩沖液不包含PEG，并與標準連接反應方案一致，該方案并沒指定利用快速的緩沖區規格。
操作說明：
反應體系:
體積 組分 終濃度
10 μL 2X Rapid Ligation Buffer 1X
X μL Vector 1-10 ng/μL
X μL Insert 1-10 ng/μL
1 μL T4 DNA Ligase (600 U/ μL) 30 U/μL
X μL Type I Water N/A
20 μL 總體積
加入以上所有成分于反應管中，吹打混勻，25℃，10min孵育，立即使用PCR洗脫柱進行DNA的純化，洗脫于50ulTE或雙蒸水存儲或者直接進行稀釋（稀釋比例至少1：10）并進行轉化，將0.1-10ng 連接產物轉入相應載體的電轉或鈣轉的感受態細胞中。
參考文獻
Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982) P.D. Boyer (Eds.), The Enzymes, 5, pp. 3. San Diego: Academic Press.
適用范圍
該產品被研制、生產加工及銷售，僅用于體外，不適用于人類和動物注射。
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產品名稱 |
產品貨號 |
規格 |
目錄價 |
秋爽價！ |
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T4 DNA連接酶（快速） |
L6030-HC-F |
26000 U |
1074元 |
720元 |
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L6030-HC-L |
240000 U |
6514元 |
4430元 |
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