葡萄糖含量檢測試劑盒 可見分光光度法

測定意義：葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產生葡萄糖。就哺乳動物而言，葡萄糖不僅是大腦神經系統、肌肉、脂肪組織等的唯一能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。
測定原理：葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯酚，生成有色化合物，在505 nm 有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品：可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

產品簡介：

葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產生葡萄糖。就哺乳動物而言，葡萄糖不僅是大腦神經系統、肌肉、脂肪組織等的唯一能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4- 氨基安替比林偶聯酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

產品內容：

試劑一：0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 25mL×1 瓶，4℃保存；

混合試劑的配制：使用前將試劑二和試劑三 1:1 等體積混合，用多少配多少。

操作步驟：

一、葡萄糖提取：

1、組織的處理：稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 蒸餾水研磨成勻漿，置沸水浴中煮沸 10 分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，常溫離心 10min，取上清液備用。

2、細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10

4個）：蒸餾水體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 蒸餾水），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3S，間隔 10S，重復 30 次），置沸水浴中煮沸 10 分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心 10min，取上清液備用。

二、測定操作表：

1、分光光度計預熱 30min。波長調至 505nm，蒸餾水調零。

2、在 1.5mL 離心管中依次加入下列試劑：

混勻，置 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴中，保溫 15min，于 505nm 波長處讀取吸光 度。

葡萄糖含量計算：

1、按蛋白濃度計算

葡萄糖含量（μmol/mg prot）＝C ×(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管－A 空白管)×V 樣÷（Cpr×V樣）＝0.5×(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管－A 空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

葡萄糖含量（μmol/g 鮮重）＝C ×(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管－A 空白管) ×V 樣÷（W÷V樣總×V 樣）＝0.5 ×(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管－A 空白管) ÷W

3、按細菌或細胞數量計算

葡萄糖含量（μmol/104 cell）＝C ×(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管－A 空白管) ×V 樣÷（500÷V樣總×V 樣）＝0.001 ×(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管－A 空白管)

C：葡萄糖溶液濃度，0.5μmol/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V 樣：加入的樣本體積，

100μL=0.1mL；V 樣總：樣本總體積，1mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞數量，500 萬。

4、若 A 測定管大于 1.5，稀釋后進行實驗。