RCA滾環擴增試劑盒-分析方法-資訊-生物在線

RCA滾環擴增試劑盒

作者:上海雅吉生物科技有限公司 2021-03-25T00:00 (訪問量:3474)

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滾環擴增(rolling circle amplification,RCA)是近幾年發展起來的一種核酸恒溫擴增方法。以環狀DNA為模板,通過一個短的DNA引物(與部分環狀模板互補),在phi29 DNA 聚合酶催化下將dNTPs轉變成單鏈DNA,此單鏈DNA包含成百上千個重復的模板互補片段。這種方法不僅可以直接擴增DNA和RNA,還可以實現對靶核酸的信號放大,靈敏度達到一個拷貝的核酸分子,因此在核酸檢測中具有很大的應用價值和潛力。 因其高靈敏度、高特異性和可操作性,RCA技術在基礎研究、實際檢測、醫療診斷及納米材料等方面都有很好的應用,結合細胞原位檢測、單核苷酸多態性SNPs,蛋白質分析、免疫芯片和全基因組的擴增等研究都能發揮其巨大的優勢。
滾環擴增試劑盒配備的phi29 DNA聚合酶具有鏈置換和連續合成特性,可連續合成長達70kb的DN**段。另外,該酶具有3’→5’外切酶校讀功能,合成的DN**段保真性高。試劑盒配備的Random Hexamers為6堿基隨機引物可對目標分子進行指數放大(通常放大10000倍)。
滾環擴增

主要特征

  • 高靈敏度:單引物RCA的擴增效率成指數擴大,可達104-105
  • 操作簡單:恒溫擴增,程序簡單化。
  • 儀器簡單:只需維持恒溫的水浴鍋。
  • 應用廣泛:可廣泛應用于基礎研究和醫療診斷等領域。

組分

名稱 100T
phi29 DNA Polymerase (20 U/μl) 50 μl
10×phi29 Buffer 1 ml
Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl) 25 μl
10mM dNTP Mixture 200 μl
25XRandom Hexamer 100 μl

儲存

-20℃可保存3年,避免反復凍融。

實例

1. 應用本試劑盒以pEasy質粒為模板, 30℃作用5h。泳道1-5是模板濃度分別為0.0004,0.004, 0.04,0.4,1 ng/μl ,泳道6-10分別為泳道1-5相對應的RCA產物用PstI酶切后的產物,M 為D10000 DNA Marker。

RCA滾環擴增試劑盒

2. 應用本試劑盒以人基因組為模板, 30℃作用5h。泳道1-6是模板濃度分別為 0.0004,0.002,0.004,0.04,0.4,1 ng/μl ,M 為D10000 DNA Marker。

RCA滾環擴增試劑盒

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