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洗板方法:
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標(biāo)本要求:?
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作程序:
1.?標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)
80ng/mL | 5號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
40ng/mL | 4號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
20ng/mL | 3號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
10ng/mL | 2號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
5ng/mL | 1號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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2.?根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.?加樣：
1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗6-keto-PGF1α抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；
2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；
3）待測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗6-keto-PGF1α抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
4.?配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.?洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄 ? ? 去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.?顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃ ? ? 避光顯色15分鐘.?
7.?終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
8.?測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。?測定應(yīng) ? ? 在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
9.?根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。
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操作程序總結(jié)：
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%
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檢測范圍：檢測范圍：3ng/mL?–80ng/mL
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保存條件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6個月(2-8℃)。
大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)酶聯(lián)免疫
? ?檢測試劑盒使用說明書????AE94071Ra
使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
用??途：用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中6-酮前列腺素F1α (6-keto- ? ? ? ?PGF1α)測定。
工作原理:
本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)水平。向預(yù)先包被了大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)，溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成:?
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | ? |
封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | ? |
密封袋 | 1個 | 1個 | ? |
酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品160 ng/mL | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
鏈霉親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
生物素標(biāo)記的抗6-keto-PGF1α抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1?ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
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