免疫組織化學（IHC）是檢測生物標記物表達的最簡單方法之一，它可以原位檢測組織或細胞的標志物。但在真正操作過程中，問題還是層出不窮。當你的IHC結(jié)果不理想時，就要靜下來，逐步分析找其原因。除了抗體和試劑很重要之外，各實驗操作細節(jié)的好壞，也是影響IHC染色結(jié)果的重要因素。
本文著重介紹，如何進行抗原修復（Antigen Retrieval）？
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抗原修復是影響IHC染色強度的因素之一，通過加熱樣本或用酶處理樣本便可完成抗原修復。在這個視頻中，我們將重點關(guān)注熱誘導的表位修復，或簡稱為HIER。在對樣本進行脫蠟以及在添加抗體來檢測靶蛋白之前，進行抗原修復。抗原修復會去除因醛基固定而形成的交聯(lián)，并解旋蛋白的二級和三級結(jié)構(gòu)，使抗體能夠檢測表位。對于深埋在蛋白結(jié)構(gòu)中的表位，這一點尤其重要。
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在你的標準HIER實驗步驟中，將樣本浸入緩沖液中，并煮沸一段時間，通常為10-20分鐘。常用加熱方法包括水浴、微波爐或高壓鍋。這些方法的修復程度各不相同，水浴效果最差，高壓鍋效果最好。CST的IHC實驗步驟建議使用微波爐，它對抗原修復是有效的，并且你的實驗室中很可能就有這個設(shè)備。
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配置1x檸檬酸鹽緩沖液，或EDTA，向您的容器裝入250mL這種緩沖液。用空白玻片填滿玻片夾的所有空槽。這將確保各個實驗之間緩沖液和熱分布一致。將蓋子稍微留一條縫隙，釋放壓力，因為這可確保緩沖液不會沸溢并露出玻片頂部。此外，過度加熱玻片會導致緩沖液流失，從而使組織變干燥。這可能會產(chǎn)生假陰性結(jié)果。抗原修復中的一個常見錯誤操作是沸騰過度，這會導致組織從玻片上脫落。為了優(yōu)化微波爐加熱時間和功率，我們建議進行預實驗。將24個空白玻片放入250ml緩沖液中，并確定達到起初沸騰時間。接下來，確定維持亞沸溫度8-10分鐘所需的功率級別。確定微波爐的條件后，每次都以相同的方式進行修復，始終使用等量的緩沖液，并用空白玻片填滿空槽。
你可以在cellsignal.cn的產(chǎn)品頁面上找到各抗體的特定應用的完整實驗步驟。如果您對某種抗體或?qū)嶒灢襟E有任何疑問，您聯(lián)系我們?nèi)珖赓M技術(shù)熱線4006-473287（GreatQ），或郵箱tech@cst-c.com.cn。祝您實驗成功！
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