中國大規模細胞培養新模式——細胞工廠-產品資訊-資訊-生物在線

中國大規模細胞培養新模式——細胞工廠

作者:無錫耐思生命科技股份有限公司 2021-04-21T10:52 (訪問量:15149)

傳統的大規模細胞培養技術
? ? ? ? 近幾十年以來,隨著生命科技不斷創新和快速發展,人類生命醫藥科學對生物制品依賴性逐漸增強,傳統的通過生物化學技術從動物組織提取生物制品的方法已無法滿足市場的需求,目前通過從動物組織中提取細胞在體外大規模培養用以表達單克隆抗體、特定的蛋白、干擾素及病毒疫苗制品已成為普遍的技術。
? ? ? ? 常用的大規模培養的動物細胞CHO、Vero、MRC-5,2BS、293T、L929及人二倍體細胞等。這些細胞主要應用于紅細胞生成素、單抗制備、疫苗生產等產品。而動物細胞在體外大規模培養需要在人工設定溫度,濕度,PH以及溶氧等條件下,在細胞培養的容器中高密度大量生產。
? ? ? ? 傳統的貼壁細胞大規模培養方法有轉瓶培養,生物反應器培養等。雖然轉瓶培養具有投資少,結構簡單,技術成熟,擴增只需加轉瓶數量等優點。但是占地空間大,勞動強度大,產率低,細胞生長密度低,瓶間差異較難控制等,因而難以產業化或規模化生產。


? ? ? ? ? ? ? 滾瓶培養


?生物反應器微載體培養

? ? ? ?生物反應器中培養是利用微載體細胞培養技術,大大提高細胞產率,減小占地面積,操作方便,重復使用;但是剪切力會降低細胞的活率,并且微載體與細胞分離困難,細胞聚團現象嚴重,在擴大到一定規模時很難再繼續放大,因而限制了該技術應用的范圍。


細胞工廠的優勢
? ? ? ? 早在三十多年前,國外就已將細胞工廠應用在大規模細胞培養技術中。而中國卻在近十年來開始逐漸普及。 細胞工廠是一種設計精巧的細胞培養容器,在有限的空間內利用了大限度的培養表面,相對滾瓶和生物反應器而言節省了大量的廠房空間,從而實現擴大產能的目的。
? ? ? ? 無錫耐思生命科技股份有限公司自主研發和設計的細胞工廠可用于工廠化大規模細胞培養,例如生產疫苗、單克隆抗體和制藥工業,特別適合于貼壁細胞,也可用于懸浮培養,在從實驗室規模進行放大時不會改變細胞生長的動力學條件,其受污染風險低,產率高,占用空間小,降低企業的質控成本和下游純化成本。



耐思(NEST)細胞工廠
? ? ? ?耐思細胞工廠可提供1,2,5,10 和40 層的規格,分為雙大口,雙小口,大小口三種,便于培養基的傾倒,連接管路進行無菌操作,使大規模細胞培養變得簡單易行,經過TC表面處理有利于細胞貼附和生長。灌液口&主體一體注塑成型,結構一體化程度高,具有更好的密封性能及機械強度,避免操作污染。


耐思細胞工廠


雙小口 雙大口 大小口


如何生產?
? ? ? ? 耐思細胞工廠使用進口原材料,符合USP Class VI標準的PS材料,專用萬級潔凈間生產,經過嚴謹驗證(浮游菌、沉降菌、懸浮粒子檢測),按GMP車間進行質量管理,確保產品質量穩定;TC表面處理后,采用超聲波焊接工藝,無任何添加成分,極大減少不明溶出物的風險,巧妙的焊接線設計,避免了焊接時顆粒物的產生。表面親水性檢測、密封性檢測、生物安全性檢測、理化安全性檢測、產品有效期驗證、包裝驗證等。自建輻照中心,進行快速有效的科學滅菌。



細胞工廠操作說明

細胞培養

細胞培養注意事項

1、請提前將細胞工廠和培養基預熱至培養溫度∶由于大的培養器要達到設定的培養溫度需要很長時間,所以在實驗開始前,將細胞工廠和培養基預熱至培養溫度,可加快細胞貼壁,并顯著提高細胞回收率。
2、請緩慢操作,避免大幅晃動產生氣泡∶ 氣泡可能導致培養基從上層流到下層。
3、避免酒精噴灑到透氣蓋上,酒精可能會濕潤疏水濾膜,導致不能透氣影響氣體交換或導致操作時不能平衡壓力。

收獲細胞

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1、培養結束后將培養液倒出。

2、使用無鈣無鎂磷酸鹽緩沖液(CMF-PBS)清洗(40-50 mL/層),若有需要重復清洗一次。
3、消化∶消化液(10-40 mL/層)提前預熱。
4、收集∶ 1000 rpm 離心5分鐘,去除消化液,收集細胞。
5、清洗∶用CMF-PBS或培養基清洗消化過的培養器。

收獲細胞注意事項

1、確保CMF-PBS完全浸過每層培養面,并輕輕前后晃動細胞工廠,將殘留的培養液清洗干凈。

2、消化液平均分布到每層,輕輕前后左右傾斜培養器,確保消化液完全浸過培養面,輕輕拍擊培養器 幫助細胞從表面脫離。

3、對于細胞工廠,由于不能清晰觀察中間層的細胞消化狀態,建議參照完全相同培養條件下的培養瓶 或單層細胞工廠的消化狀態。亦可使用專用的多層細胞培養器觀察臺來觀察每層細胞的生長狀態。

4、若清洗液或者是細胞工廠培養層存在大量細胞,則需要清洗多次或調整細胞消化的操作

5、培養溫度的一點點偏差都可能影響到細胞的收獲率,需密切關注培養的溫度是所設定的溫度。

細胞貼壁擴增情況

48 小時后觀察 L-929 細胞貼壁情況 48 小時后觀察 L-929 細胞貼壁情況

另外耐思細胞工廠可配合耐思細胞工廠配件使用,提高生產效率,避免生產過程無污染。
細胞工廠配件有SPT-50軟管,C-Flex焊接管,軟管夾,小孔轉接頭,Y型管接頭,T型管接頭,快接頭,空氣濾器等。




廣泛應用
? ? ? ? 細胞工廠培養技術在疫苗行業廣泛應用,如甲肝疫苗,其利用細胞工廠進行細胞培養和病毒擴增的技術已經非常成熟。
? ? ? ? 由于其便捷安全的操作方式,較少的占用空間,可控性好,細胞工廠已被越來越多的國內生產及科研用戶接受,既有優于轉瓶的優勢,又沒有類似生物反應器的應用限制,細胞工廠的應用將會越來越廣泛,并在今后幾年間迅速成為較成熟的新一代細胞培養技術。

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