測定意義：H2O2是生物體內最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉化的樞紐。一方面，H2O2可以直接或間接地氧化細胞內核酸，蛋白質等生物大分子，并使細胞膜遭受損害，從而加速細胞的衰老和解體；另一方面H2O2也是許多氧化應急反應中的關鍵調節因子

測定原理：H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復合物，在415nm有特征吸收。

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過氧化氫(H2O2)含量檢測試劑盒（微量法）

品牌：Solarbio | 貨號：BC3595|規格：100T/96S?

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注意：正式測定前務必取2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。?

規格：100T/96S

需自備的儀器和用品： 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、丙酮、濃鹽 酸、研缽和冰。

產品內容：

試劑一：丙酮 100mL×1 瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 3mL 濃鹽酸充分溶解備用。用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：液體 6mL×1 瓶，4℃保存； 試劑四：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；

標準品：液體 1mL×1 支，4℃保存，1mmol/mL H2O2標準液。

操作步驟：

一、H2O2提?。?

1、細菌或細胞樣品的制備： 收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一，超聲 波破碎細菌或細胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清， 置冰上待測。

2. 組織樣品的制備： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待 測。

3、血清（漿）樣品：按照每 100μL 血清（漿）加入 0.9mL 試劑一的比例充分混勻；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

注意事項： 1、由于試劑一易揮發，試劑一必須先預冷再加，研磨時必須在冰上研磨。 2、本試劑盒中試劑的揮發性較高，請帶一次性手套和口罩。

二、測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 415nm，蒸餾水調零。

2、將試劑二、三和四 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

3、如果用 96 孔板將則用丙酮將 1mmol/mL 標準液稀釋為 2μmol /mL 的標準溶液，用微量玻璃比色 則用丙酮將 1mmol/mL 標準液稀釋為 1μmol /mL 的標準溶液。

4、在 EP 管中按順序加入下列試劑

加入試劑四溶解沉淀后（可先用丙酮清洗 3-5 次來洗去植物色素），室溫靜置 5min，取 200μL 轉移至微量玻璃比色皿或 96 孔板中測定 415nm 處吸光值。對照管只要做一次即可。計算?A 測定=A 測定管-A 對照管，?A 標準=A 標準管-A 對照管。

三、H2O2含量計算：

1、按照細菌、細胞數量計算： H2O2含量（μmol/10 4cell）=?A 測定÷（?A 標準÷C 標液）×V 樣本÷(500×V 樣本÷V 提取) =0.004×?A 測定÷?A 標準。

2、按組織鮮重計算： H2O2含量（μmol/g 鮮重）=?A 測定÷（?A 標準÷C 標液）×V 樣本÷(V 樣本÷V 提取×W) =2×?A 測定÷?A 標準÷W。

3、按照蛋白濃度計算： H2O2含量（μmol/mg prot）＝?A 測定÷（?A 標準÷C 標液）×V 樣本÷（Cpr×V 樣本） =2×?A 測定÷?A 標準÷Cpr。

4、按血清（漿）體積計算： H2O2含量(μmol/mL)= ?A 測定÷（?A 標準÷C 標液）×10 =20×?A 測定÷?A 標準。

500：細胞或細菌總數，萬個；C 標液：H2O2標準溶液濃度，2μmol/mL；

V 樣本：加入的樣本 體積，0.25mL；W：組織鮮重，g；V 提取：提取過程中所用體積，1mL；

Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL； 10：血清稀釋倍數，[0.1mL 血清（漿）+0.9mL 試劑一] ÷0.1mL 血清（漿）=10。

注意：如果用微量玻璃比色皿（光徑 d=1cm）將 1mmol/mL 標準液稀釋為 1μmol /mL 的標準溶液。 計算公式亦作改變。

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