建立高特異性和高靈敏度的小鼠血清瘦素(Leptin) 放射免疫分析方法,用于測(cè)定小鼠血清中瘦素水平。用國(guó)外Peprotech公司進(jìn)口的人工重組的小鼠leptin 多次免疫兔子獲取高效價(jià)、高特異的小鼠leptin 抗體。用氯氨T 法制備125 I 標(biāo)記的leptin , 經(jīng)Sep2hadex G225 純化。抗原抗體反應(yīng)采用平衡一步法, 4 ℃培養(yǎng)24 h 后經(jīng)PR 試劑分離結(jié)合和游離的標(biāo)記抗原。該法測(cè)定范圍為1. 1～300 ng/mL , 最低檢出值為0. 5 ng/mL ,批內(nèi)和批間誤差小于4. 4 %和6. 7 %。
用該法測(cè)定正常小鼠23 例,血清leptin為(39. 65 ±15. 72) ng/mL ,而人leptin 放射免疫法為(1. 56 ±0. 45) ng/mL ,具有顯著的差異,2 組數(shù)據(jù)有中等程度的相關(guān)性( r = 0. 621 8) 。用該法測(cè)定正常人樣本30 例,血清leptin 為(19. 46 ±7. 09) ngPmL ,而人leptin 放射免疫法為(10. 08 ±5. 20 ) ng/mL ,具有顯著差異,但不存在明顯的相關(guān)性( r = - 0. 095 9) 。
? 用該法發(fā)現(xiàn)燙傷大鼠血清leptin 明顯下降(14. 33 ±3. 52) ng/mL 與(6. 71 ±3. 14) ng/mL ,燙傷大鼠切痂后leptin 于96 h 內(nèi)恢復(fù)正常水平(12. 08 ±4. 05) ngPmL。該法穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、特異、靈敏,適于檢出小鼠和大鼠血清中的leptin 水平, 而不適合于檢測(cè)人血清內(nèi)leptin 水平。
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